第六酶工 程制药.pptxVIP

第一节、酶工程简介 酶工程是酶学和工程学相互渗透结合发展而形成一门新的技术学科。它是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。酶工程的研究内容酶的分离、提纯、大批量生产及应用开发。酶和细胞的固定化及酶反应器的研究。酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶的研究。酶的分子改造与化学修饰以及酶的结构与功能之间关系的研究。有机相中酶反应的研究。酶的抑制剂、激活剂的开发及应用研究。抗体酶、核酸酶的研究。模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、合成的研究。二、酶的来源提取分离法：动物、植物组织、器官、细胞生物合成法：动物、植物、微生物细胞化学合成法：实验室阶段，尚不成熟微生物发酵生产酶的优势1、微生物种类多，酶的品种齐全；2、微生物繁殖快，生长周期短，产量高；3、微生物培养方法简单，原料来源丰富，价格低廉，产量高，经济效益高；4、微生物具有较强的适应性和应变能力，菌种易诱变，易于控制代谢方向；三、酶生产菌1、对菌种的要求（1）繁殖快，产酶量高，酶的性质应符合使用要求，最好是产胞外酶；（2）不是致病菌，不产生毒素以及其他生理活性物质。（3）产酶性能稳定，不易变异、退化，不易感染噬菌体；产生的酶便于分离，容易提纯，收得率高；（4）容易培养，能利用廉价的原料，发酵周期短；2、生产菌的来源3、目前常用的产酶微生物大肠杆菌生产谷氨酸脱羧酶用于测定谷氨酸含量生产天冬氨酸酶催化延胡索酸生成L-天冬氨酸生产苄青霉素酰化酶生成新的半合成青霉素或头孢菌素类生产β-半乳糖苷酶用于分解乳糖枯草芽孢杆菌生产α -淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酯酶青霉菌生产葡萄糖氧化酶、青霉素酰化酶等链霉菌生产青霉素酰化酶、葡萄糖异构酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、羟化酶等啤酒酵母其他四、酶在医药领域的应用 第二节 酶和细胞的固定化一、固定化酶的制备⒈固定化酶的定义： 固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。⒉固定化酶的特点 具有生物催化剂的功能，又有固相催化剂的功能。优点： ①可多次使用 ②反应后，酶底物产物易分开，产物中无残留酶，易纯化，产品质量高。③反应条件易控制。④酶的利用效率高。⑤比水溶性酶更适合于多酶反应。缺点：①酶的活力有损失 ②增加生产成本③只能用于可溶性底物，且较适用于小分子底物④胞内酶必须经过酶的分离纯化⑤与完整菌体相比不适宜于多酶反应。⒊酶的固定化方法与制备技术 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞）⑴载体结合法 ①物理吸附法 ②离子结合法 ③共价结合法⑵交联法⑶包埋法 ①网格型 ②微囊型⑷选择性热变性法⒋酶和细胞的固定化载体⑴吸附载体⑵包埋载体⑶交联载体表6-1二、固定化细胞的制备⒈固定化细胞的定义 将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术。 被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。⒉固定化细胞的特点 有细胞特性，生物催化剂功能，固相催化剂特点。 优点： ①无须进行酶的分离纯化 ②保持酶的原始状态，酶回收率高 ③比固定化酶稳定性高 ④细胞内酶附助因子可再生 ⑤细胞本身含多酶体系 ⑥抗污染能力强局限性：①仅利用胞内酶，会形成无用的副产物 ②细胞膜、细胞壁和载体都存在扩散限制作用 ③载体形成的空隙大小影响分子底物的通透性⒊固定化细胞的制备技术 ⑴载体结合法 是将细胞悬液直接与水不溶性的 载体 相结合的固定化方法。 ⑵包埋法 将细胞定位于凝胶网格内的技术。 ⑶交联法 用多功能试剂对细胞进行交联的固 定化方法。 ⑷无载体法 靠细胞自身的絮凝作用制备固定 化细胞的技术。三、固定化方法与载体的选择依据⒈固定化方法的选择⑴固定化酶应用的安全性⑵固定化酶在操作中的稳定性⑶固定化的成本⒉载体的选择四、固定化酶和固定化细胞的形状与性质⒈固定化酶的形状⑴颗粒状固定化酶⑵纤维状固定化酶⑶膜状固定化酶⑷管状固定化酶⒉固定化酶的性质⑴酶活力的变化*原因⑵酶稳定性的变化 ①操作稳定性 ②贮藏稳定性 ③热稳定性 ④对蛋白酶的稳定性⑶酶学特性的变化 ①底物专一性 ②最适pH ③最适温度 ④米氏常数 ⑤最大反应速度3.固定化细胞的性质 细胞被固定化后，酶的性质、稳定性、最适温度和Km值通常与固定化酶相仿。 五、固定化酶（细胞）的指标 单位时间内，单位体积中底物减少量或产物增加量来表示。 酶活力:在单位时间内单位体积中的底物减少量或产物增加量来表示。 对于某些不能通过底物或产物的变化量来测定其活力的酶促反应，也可以通过与其产物相偶联的酶促反应来测定其活力，即使第一个