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生物工程综合实验;实验原理;15升发酵罐图示;发酵罐罐路示意图;管路说明;实验步骤;5.溶氧电极标定:
零点标定:将电极拔出浸没于饱和的无水亚硫酸钠溶液中,待电极显示值稳定后标零点1%。斜率标定:溶氧电极的斜率(满度)标定一般在发酵之前,温度、罐压、通气量均在正常情况下进行,一般以100%标定,因为它是个相对值,也可以是其他数值,罐压对溶氧量影响较大,标定时应保持罐压相对稳定。
6.pH电极标定:
pH电极零点和斜率不能在发酵状态下标定,只能在灭菌以前进行,但可以在发酵过程中进行零电位补偿。标定前电极需泡于液体中并已联机1小时以上,通常采用两点标定法:先将电极洗净擦干,然后浸入6.86缓冲液,并将零点标定值设为6.86,然后按开始标定键,待pH显示值稳定后可按零点标定结束键,然后洗净擦干电极后同样方法标定斜率,然后再标定零点,反复至更换缓冲液时,pH未经标定已达标准值(附近)即可。
7.蠕动泵流量标定
蠕动泵的标定随时可以进行。可以对酸、碱泵、补料泵、消泡剂泵进行标定,方法相同。先取定量的液体,安装好,然后在标定画面上设为标准容量。然后将手、自动开关调节到手动位置,使泵运转并将管内空气排出开始滴液,将出口液体滴入标准容器,同时按标准开始键并确定,此时开始以秒为单位计数,待输出液体到达设定的标准容量时,再按确定。整个标定过程结束。此时,加料速度便由控制器显示出来。标定结束后将开关置于“关”的位置。
8.将4步骤配制好的培养基加入发酵罐中,加水至体积约11.5升(防止水蒸发过多)。
;二、实罐灭菌操作;3、实罐灭菌
蒸汽进过滤器:停搅拌,微开过滤器上排冷凝水阀V02,开过滤器前蒸汽阀S02,微开过滤器后排冷凝水阀V03,缓缓开切断阀A03,蒸汽经过过滤器进入反应器,当冷凝水阀V02、V03出口冷凝水很少时,调节冷凝水阀V02、V03以有少量蒸汽排出为宜。当排气口有蒸汽排出或罐温到达100℃两分钟后,关闭排气阀VT1。调节切断阀A03和蒸汽阀S02,维持过滤器前蒸汽压力为0.12-0.16MPa,同时必须保证切断阀有一定开度,不得关死。当罐温达到100℃时,培养基中的溶氧接近零??可以标定溶氧的零点。
当达到预定温度或罐压,开排气阀VT1至有少量蒸汽排出,关紧或微开夹套蒸汽阀S01,微开底阀P01(开阀时观察视镜处培养基翻腾的变化,以有少量变化为宜),根据罐压或罐温变化的趋势。及时调节蒸汽阀S02、S03。阀门调节应微调,避免大幅度开关。当反应器罐压或罐温维持在预定的范围内开始计时。
保温开始后,排气阀蒸汽排量不宜太小,否则可能导致液面以上的罐体部分尤其罐盖达不到消毒温度。
保温阶段应旋松接种口盖至有少量蒸汽冒出。;三、接种;谢谢!
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