食品微生物学检验 沙门氏菌检验.ppt

GB 4789.4—2010食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验;沙门菌概况;虽然沙门菌的血清型很多，但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约40~50个血清型。而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。 分类： 伤寒沙门菌(伤寒、副伤寒)-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。 非伤寒沙门菌-食品卫生标准的检测的主要对象。 ;沙门菌的生物学特性;营养需求不高，需氧或兼性厌氧。普通营养培养基上均能生长，能够利用柠檬酸盐作为碳源。 在普通肠道选择性平板上基本上形成无色菌落。菌落中等大小，半透明，表面光滑，边缘整齐或呈锯齿状。 不分解乳糖，大部分菌株产H2S，发酵葡萄糖产酸不产气。 ;最适培养温度为37℃，最适pH 7.2～7.6。 耐受胆盐，在粪便、土壤、食品、水中可生存5个月至二年之久。;沙门菌的分布;沙门氏菌检验程序;目的：修复损伤的细菌细胞； 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态， 不需要均质，振荡混匀。 如使用均质袋，可直接 进行培养。于36 ℃±1 ℃ 培养8 h～18h。 ;无菌均质袋;轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培养18 ～24 h。 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。 为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用两种以上选择性分离培养基。 ;分离培养基回收率测定（%）;典型菌落--BS;典型菌落--HE;典型菌落--XLD;典型菌落--CHRO;初筛微生物;生化试验 ;穿刺TSI方法;接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水 (供做靛基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h, ??要时可延长至48 h。 将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温至少保留24 h，以备必要时复查。 ;沙门氏菌属的三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验结果 ;TSI的反应 赖氨酸脱羧酶试验;沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 ;沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 ;沙门氏菌属各生化群的鉴别必要时按此表进行沙门菌生化群鉴定 ;沙门菌的增菌培养基;沙门菌的增菌液;沙门菌的分离培养基;沙门菌的分离培养基;沙门菌的分离培养基;分离培养中的注意要点;BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落，其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平板培养24±2小时后，没有出现典型菌落，则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个非典型的菌落。 ;沙门菌显色培养基;可疑菌落的生化鉴定;沙门菌在TSI琼脂上的反应;赖氨酸脱羧酶试验;靛基质试验;尿素酶试验;氰化钾试验;沙门菌生化鉴定培养基- β-半乳糖苷酶(ONPG)试验;沙门菌生化鉴定的主要试验项目;沙门菌在API 20E的典型反应;VITEK GNI＋;沙门菌的血清学鉴定;血清学鉴定时的注意要点： 做血清凝集时，同时应用生理盐水做对照。 O血清不凝集时，可将菌株转接于琼脂量较高(如2.5~3%)的斜面上，再做凝集。 如果由于Vi抗原的存在而阻止了O抗原的凝集反应时，应挑取菌苔于1mL生理盐水中做成菌悬液。煮沸后再检查。(常见于伤寒沙门菌)。 当二相沙门菌只检出一相H抗原时，可在琼脂斜面上移种1~2代后再检查，如仍只检出一相H抗原，可用位相变异的方法诱导另一相。;