沙门菌检查法.pdfVIP

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沙门菌检查法 1 简述 沙门菌属是肠杆菌科的重要致病菌,按 Bergey 系统细菌学手册第一 卷( 1984),沙门菌分 5 个亚属。 2003 年出版的第八版的临床微生物 手册将沙门菌属分成两个菌种即肠炎沙门菌和乍得沙门菌, 其中肠炎 沙门菌分 6 个亚种,包括常见的伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙 型副伤寒、,鼠伤寒,猪霍乱等沙门菌杂内,迄今已发现 2501 个血清 型。 O抗原抗血清 A-E 群包含了沙门菌分离株的 95%,所以常用沙门 菌 A-F O多价血清进行沙门菌初筛试验。药品中的沙门菌,是以鉴定 沙门菌属为准,即对没 10g (或10ml)药品中是否检出沙门菌作出检 验报告。 由于沙门菌血清型繁多, 各血清型的生化及血清学特性虽密切相 关,却不尽相同, 采用一种增菌培养基和两种分离培养基,不可能涵 盖所有沙门菌的最适增菌及分离条件。 此外, 由于药品在生产过程中, 常受到加热、干燥等加工步骤的 影响,药品中污染的沙门菌可受到损伤或呈休眠状态, 故须在增菌培 养前先进行预增菌。然后再进行增菌及分离、三糖铁琼脂初步鉴别、 生化试验、血清学试验等步骤。 2 仪器、设备及用具(见大肠埃希菌 2)。 3 试液指示液(参见大肠埃希菌 3) 3.1 无菌脲试液 [ 附录 2.5] 。 3.2 酚磺酞指示液 [ 附录 4.4] 。 3.3 亮绿试液 [ 附录 2.9] 。 3.4 氰化钾试液 [ 附录 2.14] 。 3.5 溴甲酚紫指示液 [ 附录 4.5] 。 3.6 革兰染色液 [ 附录 2.4 ,2.10 ,2.16] 。 3.7 沙门菌属 A-F “O”多价血清 (即O多价 1)生物制品研究所供应。 4 培养基 4.1 营养琼脂培养基 [ 附录 5.2] 。 4.2 营养肉汤培养基 [ 附录 5.1] 。 4.3 半固体营养琼脂培养基 [ 附录 5.3] 。 4.4 曙红亚甲蓝琼脂培养基( EMB)[ 附录 5.8] 。 4.5 麦康凯琼脂培养基( MacC)[ 附录 5.9] 。 4.6 四硫磺酸钠亮绿培养基( TTB)[ 附录 5.11] 。 4.7 三糖铁琼脂培养基( TSI )[ 附录 5.10] 。 4.8 胆盐硫乳琼脂培养基( DHL)[ 附录 5.13] 。 4.9 沙门菌属志贺菌属琼脂培养基( SS)[ 附录 5.12] 。 4.10 蛋白胨水培养基 [ 附录 5.18] 。 4.11 脲(尿素)琼脂培养基 [ 附录 5.23] 。 4.12 氰化钾培养基 [ 附录 5.24] 。 4.13 赖氨酸脱羧酶培养基 [ 附录 5.25] 。 5 对照用菌液 取乙型副伤寒沙门菌 [CMCC(B)50094] 是营养琼脂斜面培养物少许, 接种至 5ml 营养肉汤培养基内, 36℃± 1℃培养 18~24h 后,用 0.9% 无菌氯化钠溶液稀释至 1:10 6 (浓度相当于 50~ 100cfu/0.1ml ),作 阳性对照用菌液。其菌液浓度可用平板菌落计数法测得。即取 0.1ml 加入平皿内,倾注营养琼脂,混匀,或以 0.

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