酶与蛋白质工程 第1章 蛋白质与蛋白质工程.ppt

* * 四級構造 的妙用，可以 血紅蛋白 (Hb) 與 肌紅蛋白 (Mb) 的例子說明。 Hb 是四元體，有所謂的四級構造；Mb 為單元體，只有三級構造。Hb 在血中循環，由肺泡中取得氧分子，運送到肌肉中，下載給 Mb。 因此 Hb 必須得知，何時該吸收氧分子，何時該放出；也就是說 Hb 必須有感應氧分子濃度的能力，同時還得做出吸收或放出的動作。這些能力都源自其四級構造的組成。 在靜脈中 Hb 都不載有氧分子，這時候它的四個次體分子都處於一種休息狀態，結合區不容易張開讓 heme 接受氧分子。 當 Hb 循環到肺部時，環境的氧分子濃度提高了，四個次體的任何一個分子接上一個氧分子後，馬上會牽動其它次體，使得其它次體的分子構造舒張，變得很容易接受氧分子。因此在肺部的 Hb 都很容易地滿載氧分子，經動脈輸送至肌肉。若當時肌肉相當勞累，需要大量氧分子的補充，其酸鹼度會降得比較低，Hb 就更容易釋出氧分子，而 Mb 則一昧地吸收 Hb 所下的氧分子，並無調節作用。放下氧分子的 Hb 就回復休息狀態，循著靜脈流回肺部。 蛋白質的構形事實上都不是固定不動，其分子會有某些程度的運動，上述的 Hb 分子也是如此。當其處於休息狀態時，是分子較為緊密的一種構形，稱之為 tense (T) 型；反之，若其構造較為疏鬆，則基質或其結合對象比較容易進入，稱之為 relaxed (R) 型。 T 與 R 型的變化，在酵素分子的活性調節也很重要，在酵素部分會繼續提到。 P67 * * 蛋白质人为进化 定向进化 随机突变+选择 体外定点突变 随机突变 易错PCR DNA shuffling 高突变菌株 tRNA介导的蛋白质工程 tRNA-mediated protein engineering （TRAMPE） 通过拓展遗传密码，可以将人为设计的非天然氨基酸选择性掺入蛋白质，改进蛋白质的检测与分离方法 蛋白质剪接 由蛋白质内含肽所介导。是一个蛋白质翻译后的加工过程。蛋白质内含肽是一个蛋白质前体中的多肽序列，可以催化自身从蛋白质前体中断裂，使两侧的蛋白质外显子连接成成熟的蛋白质 蛋白质修饰 N端-乙酰化（Acetylation） 甲酰化（Formylation） C-端酰胺化（Amidation，C-termainal） 磷酸化（Phosphorylation） 生物素修饰（Biotin） 环化修饰（N-端和C-端首尾成环、Lys和Asp或Glu环化） 肉豆蔻酸（Myristoyl） 香豆素修饰 pGlu焦谷氨酸修饰 FITC （异硫氰酸）荧光修饰 FAM荧光修饰 主要问题 ①改造对象有没有测定出空间结构 如果没有测定出空间结构，有没有同源蛋白的空间结构，如果都没有，就很难进行后续的分子设计 ②结构和生物功能的联系是否明确 有些蛋白质虽然已经测定了空间结构，但其功能部位还不确定，这样的蛋白改造起来也有一定盲目性 ③是否易于进行分子设计和最后的基因工程生产 ④所改造蛋白的经济效益和社会效益 next To be continued... 第二讲 酶与酶工程 此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 蛋白质的高级结构 一条或数条多肽链上所有原子和基团在三维空间上的排布，即构象（conformation）或空间结构 蛋白质的高级结构由明显的结构层次 一级结构是空间结构的基础 （1）非共价键 氢键 离子键 范德瓦尔力 疏水作用 （2） S-S键 维持蛋白质空间结构中重要的化学键 蛋白质结构层次 蛋白质结构极其复杂，但具有明显的结构层次 一级结构（多肽链上的氨基酸排列顺序） 二级结构（多肽链主链骨架的局部空间结构） 超二级结构（二级结构单位的集合体） 结构域（多肽链上可以明显区分的球状区域） 三级结构（多肽链上所有原子和基团的空间排布） 四级结构（由球状亚基或分子缔合而成的集合体） 蛋白质的主要结构层次 二级结构 二级结构（secondary structure）：指多肽链主链在一级结构的基础上进一步的盘旋或折叠，形成的周期性构象，维系二级结构的力是氢键 二级结构主要形式有： α-螺旋、β-折叠、β-转角、无规卷曲 α-螺旋（ α-helix） 在角蛋白中最常见的构象，为右手螺旋。每圈螺旋3.6个氨基酸残基。侧链基团R在螺旋外侧。主