流式细胞术原理与应用.pdfVIP

流式细胞术详解 一 . 流 式 细 胞 术 概 述 流 式 细 胞 术 (Flo w Cytometry, FCM) 是 七 十 年 代 发 展 起 来 的 高 科 学 技 术 ,? 它 集 计 算 机 技 术 、 激 光 技 术 、 流 体 力 学 、 细 胞 化 学 、 细 胞 免 疫 学 于 一 体 , 同 时 具 有 分 析 和 分 选 细 胞 功 能 。 它 不 仅 可 测 量 细 胞 大 小 、 内 部 颗 粒 的 性 状 , 还 可 检 测 细 胞 表 面 和 细 胞 浆 抗 原 、 细 胞 内 DNA 、 RNA 含 量 等 , 可 对 群 体 细 胞 在 单 细 胞 水 平 上 进 行 分 析 , 在 短 时 间 内 检 测 分 析 大 量 细 胞 , 并 收 集 、储 存 和 处 理 数 据 ,进 行 多 参 数 定 量 分 析 ; 能 够 分 类 收 集 ( 分 选 ) 某 一 亚 群 细 胞 ,分 选 纯 度 ＞ 95% 。在 血 液 学 、免 疫 学 、肿 瘤 学 、药 物 学 、分 子 生 物 学 等 学 科 广 泛 应 用 。 国 内 使 用 的 流 式 细 胞 仪 主 要 由 美 国 的 两 个 厂 家 生 产 :BECKMAN - COUL TER 公 司 和 Becton-Dickinson 公 司 ( 简 称 B-D 公 司 ) 。 流 式 细 胞 仪 主 要 有 两 型 : 临 床 型 （又 称 小 型 机 、 台 式 机 ） 和 综 合 型 （又 称 大 型 机 、 分 析 型 ） 。 BECKMAN- COUL TER 公 司 最 新 产 品 为 EPICS AL TRA 和 EPICS XL / XL- MCL, B-D ? 公 司 最 新 产 品 为 FACS Vantage 和 FACS Calibu r 。 EPI CS XL/ XL- MCL 和 FACS Calib ur 是 临 床 型 ; EPI CS AL TRA 和 FACS Vantage 是 综 合 型 ， 除 具 备 检 测 分 析 功 能 外 ,还 具 有 细 胞 分 选 功 能 , ? 多 用 于 科 学 研 究 。 二 .流 式 细 胞 仪 主 要 技 术 指 标 1 ． 流 式 细 胞 仪 的 分 析 速 度 ： 一 般 流 式 细 胞 仪 每 秒 检 测 1000 ～ 5000 个 细 胞 ,大 型 机 可 达 每 秒 上 万 个 细 胞 。 2 ． 流 式 细 胞 仪 的 荧 光 检 测 灵 敏 度 ： 一 般 能 测 出 单 个 细 胞 上 600 个 荧 光 分 子 , 两 个 细 胞 间 的 荧 光 差 ＞ 5% 即 可 区 分 。 3 ． 前 向 角 散 射 （FSC ） 光 检 测 灵 敏 度 ： 前 向 角 散 射 （F SC ） 反 映 被 测 细 胞 的 大 小 ,一 般 流 式 细 胞 仪 能 够 测 量 到 0. 2 μm～ ０.5 μm。 4 ．流 式 细 胞 仪 的 分 辨 率 ：通 常 用 变 异 系 数 CV 值 来 表 示 ，, 一 般 流 式 细 胞 仪 能 够 达 到 2.0% , 这 也 是 测 量 标 本 前 用 荧 光 微 球 调 整 仪 器 时 要 求 必 须 达 到 的 。 5 ．流 式 细 胞 仪 的 分 选 速 度 ：一 般 流 式 细 胞 仪 分 选 速 度 ＞ 1000 个 / 秒 ，分 选 细 胞 纯 度 可 达 99% 以 上 。 三 .流 式 细 胞 仪 主 要 构 造 和 工 作 原 理 流 动 室 及 液 流 驱 动 系 统 流 式 细 胞 仪 主 要 由 以 下 五 部 分 构 成 :① 流 动 室 及 液 流 驱 动 系 统 ② 激 光 光 源 及 光 束 形 成 系 统 ③ 光 学 系 统 ④ 信 号 检 测 与 存 储 、 显 示 、 分 析 系 统 ⑤ 细 胞 分 选 系 统