红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验.pdfVIP

红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验 流感病毒表面的血凝素（ HA）蛋白，含有识别和结合宿主细胞 表面受体的结构， 能使一些特定的红细胞发生凝集现象。 当红细胞和 病毒按适当的比例混合后， 由于病毒的作用使红细胞发生凝集， 此为 凝集现象。含有特异的抗流感病毒 HA 蛋白的抗血清，能抑制红细胞 凝集现象的出现， 即抗体与病毒结合后， 可以使血凝素不能吸附于红 细胞表面的受体上，此为红细胞凝集抑制（ HAI）。 微量红细胞凝集抑制试验是目前最常用的一种鉴定流感病毒型 / 亚型及分析流感病毒 HA 抗原性变异的试验方法，也可以用于对一般 人群抗体水平的检测和疫苗效果的评价等方面。 用于 HAI 试验的标准参照血清必须及时更新，用于鉴定流感病 毒型/ 亚型应包括当年的国际疫苗株或国内流行代表株的抗血清，可 以用羊、鸡、雪貂、兔等实验动物的抗血清；用于抗原分析的抗血清 建议包括同一型别和亚型不同毒株免疫的标准参考抗血清， 由于用雪 貂制备的抗流感病毒血清特异性高， 易将不同毒株间抗原性差异显示 出来，因此常用免疫雪貂的抗血清进行抗原分析。 HAI 试验中所用的 血清必须经特殊处理以去除非特异性抑制素及非特异性凝集素。 （一）生物安全要求 所有有关试验操作都应在相应生物安全级别的实验室中进行， 必 须遵守生物安全规定， 严格执行标准操作规程和废弃物管理规定， 做 好个人防护要求。 季节性流感病毒病毒或经完全灭活的高致病性禽流 感病毒操作可以在 BSL-2实验室里进行，高致病性禽流感病毒的操作 在 BSL-3级实验室中进行。 （二）实验所用试剂 1．标准参考抗原：以国际疫苗株和国内流行株作为标准参考抗 原，新分离的毒株作为待测抗原。 2. 标准参考抗血清： 以国际疫苗株和国内流行株制备的抗血清作 为标准参考血清。血清要经 RDE 处理。 （三）其他试剂/ 材料/ 仪器 1. 红细胞悬液 2. PH7.4 的 PBS 缓冲液 3. RDE （日本生研） 4. 水浴箱（ 37℃，56℃） 5. 台式离心机 6. 多道可调加样器、单道可调加样器 7. 离心管 8. 96 孔微量血凝板（使用豚鼠和人红细胞进行实验须用 “U底” 板，使用火鸡红细胞进行实验用 “V”底板） 9. 200 μL 、1000 μLTIP 头、水槽 表 1. 流感病毒红细胞凝集试验各项条件比较 红细胞 火鸡 豚鼠 人 “O”型血 终浓度 0.5 0.5 0.5 孔底部形状 V 型 U 型 U 型 孵育时间 25-30min 45-60min 45-60min 红细胞沉积形状 细胞沉积成点状，倾 细胞沉