实验三-琼脂糖凝胶电泳检测DNA.ppt

实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA ;实验目的;2. 琼脂糖介质结构均一，含水量大（98-99%），可通过调整琼脂糖的浓度改变孔径的大小，起到分子筛的作用。 琼脂糖凝胶电泳 200bp—50kb（分离范围广、方便） DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 ;3. 溴化乙锭（EB）是一种吖啶类染料，它在紫外灯照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分碱基对子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。;器材与试剂;核酸样品 DNA marker DL2000 电泳缓冲液：本实验选用TBE 6×上样缓冲液（ Loading buffer ）： 4℃贮存。增加样品密度，使样品带颜色，起指示作用。 0.25% 溴酚蓝、0.25% 二甲苯青FF、30％ 甘油水溶液 10mg/ml 溴化乙锭（EB）：贮存液，棕色瓶室温保存。终浓度是0.5μg/ml。 ;操作步骤;2、胶床准备： ①取出洗净并晒干的胶床和梳子 ②将梳子垂直插入到胶床的小凹槽内，梳齿底端和床面有1mm的间隙。 ③将胶床放在调整好的水平台上。;3、铺胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶床内，凝胶厚度3～5mm。;7、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积1/6的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。例如，5微升的DNA样品+1微升的上样缓冲液，以此类推。;8、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中。加样量一般10～30μl。;10、电泳结束后，切断电源，取出凝胶 （手套拿取凝胶）。; 影响迁移率的因素 DNA分子的大小 琼脂糖凝胶的浓度 DNA的构象 所加电压 一般5V/cm 电场方向 染料的存在与否 电泳缓冲液的组成;注意事项