发酵过程控制（ControlofFermentationProcess)第四章生物传感器简介.pptVIP

某些酶传感器一览表 待测物质 固定化酶 转换器 测量范围(mg/L) 响应时间（min） 稳定性(day) 葡萄糖 葡萄氧化酶 铂电(H2O2) 氧电极(O2) 1~5×103 1~5×102 15(S) 10(S) 60~100 100 各种糖 蔗糖酶、变旋酶葡萄糖氧化酶 氧电极(O2) 100~5000 5 14 乳酸 乳酸脱氢酶 燃料电极(NADH) ~1000 30 (S) 14 乙醇 乙醇脱氢酶 乙醇氧化酶 原电池 铂电极(H2O2) 4600 0~30%(V) 40 20(S) 14 30 尿素 尿酶 铵电极(NH4+) 氨电极(NH3) 10~1000 10~1000 0.5~1 2~4 21 30 青霉素 青霉素酶 玻璃电极(H+) 10~1000 0.5~2 7~14 L-酪氨酸 酪氨酸脱羧酶 CO2电极(CO2) 10~104 1~2 20 4.4 微生物传感器 在酶传感器制造中，首先遇到的困难就是酶的提取与精制。 微生物膜作为分子识别元件利用： ①利用微生物细胞内单一或多个酶的机能——类似于酶传感器； ②利用微生物的生理机能。 4.4.1 微生物传感器的原理与分类 酶活性测定型——以微生物酶催化反应的活性为指标；（类似于酶传感器） 呼吸活性测定型——以微生物呼吸活性为指标； 电极活性物质测定型——以微生物代谢产物为指标。 （1）呼吸活性测定型——必须是好气性微生物 氧浓度↓ 氧电极 电流值↓ CO2生成 CO2电极 电位值↑ 氧 微生物利用 的被测物质 好气微生物膜 （2）电极活性物质测定型——包括厌氧和好氧微生物 待测物质 固定化 微生物膜 CO2 CO2电极 电位式 H2 铂阳极，Ag2O2阴极 电流式 NH3 氨电极 电位式 H+ 玻璃电极 电位式 还原型辅酶 燃料电极 电流式 4.4.2 微生物传感器特点 （1）微生物较酶易获得，价格相对较低； （2）稳定性好，连续使用时间可达一个月左右； （3）响应时间比酶传感器长，多数在10分钟左右； （4）特异性较酶传感器差。 4.4.3 微生物传感器实例 例1：谷氨酸传感器 谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸的反应为： HOOC-(CH2)2-CHNH2-COOH 谷氨酸脱羧酶 HOOC-(CH2)2-CH2NH2 + CO2 （1）传感器制备 大肠杆菌细胞 ↓ 冷冻干燥 ↓ 用水调匀 ↓ 涂布于尼龙网（60目，ф7mm）两面 ↓ 置于CO2电极上 ↓ 外用赛璐酚膜盖住 ↓ 谷氨酸传感器 电极膜（硅橡胶膜） 细胞尼龙网(大肠杆菌) 赛璐酚膜 CO2 电 极 （2）测定原理 （3）主要性能 A．响应时间：5min左右； B．测量范围：10~800mg/L； C．使用寿命：20day。 在无氧条件下 （4）专一性： A．对谷氨酰胺有响应，对其它氨基酸的作用可忽略。 B．葡萄糖7.9g/L、醋酸0.2g/L时，无影响。 C．无机离子影响可忽略。 例2：氨传感器 （1）测定原理 硝化菌氧化铵的反应要消耗氧： NH4+ + O2 硝酸菌 NO2― NO2― + O2 硝化细菌 NO3―  NH4+ 微生物反应 电极旁O2浓度↓电化学反应 电流值↓→推算NH4+浓度 硝化菌膜上 氧电极上 （2）传感器制备 活性污泥 ↓分离 硝化菌 ↓ 固定于乙酸纤维素膜 ↓ 安装于氧电极上 ↓ 测定铵（氨）微生物传感器 氧电极 Pt 乙酸纤维素膜(硝化菌) 透气膜 聚四氟乙烯膜 （3）主要特性 响应时间：2min(pH=10的缓冲溶液中) 测量范围：1～42 mg/L 相对误差：4% 使用时间：20day 某些微生物传感器一览表 待测物质 微生物膜 电极 测定范围（mg/L ） 响应时间(min) 稳定性(day) 葡萄糖 P. flourescens 氧电极 5～20 10 14 乙醇 T. brassicae 氧电极 5～30 10 30 醋酸 T. Brassicae 氧电极 10～100 10 20 甲酸 C. butyricum 铂阳极、Ag2O2阴极 1～300 30 30 谷氨酸 E. Coli Sar