正常人体学DNA合成损伤修复.pptxVIP

第十五章基因信息传递中心法则RNA复制转录翻译复制DNA RNA 蛋白质逆转录第一节DNA合成与损伤修复一、DNA复制几个基本原则(一)半保 留复制(semiconservative replication)模板：亲代DNA双链(每股均可为模板)原则：按碱基配对原则(A-T、G-C)指导新链合成特点：合成两个子代DNA分子碱基序列与亲代分 子完全一样，但其中一条链来自于亲代 DNA链，另一条链是新合成链AGGTACTGCCACTGGTCCATGACGGTGACC新合成 链TCCATGACAGGTACTGAGGTACTGTCCATGACAGGTACTGCCACTGGTCCATGACGGTGACCAGGTACTGCCACTGGTCCATGACGGTGACC+CCACTGGGGTGACC亲代DNA子代DNA(二)半不连续复制(semidiscontinuous replication)(亲代)DNA两股链反向平行→两股子链反向平行5 ’3 ’亲代3 ’5 ’5 ’3’子代3 ’5 ’3’ 5 ’子代5’3 ’存在两种DNA聚合酶？ 5’→3’ 3’→5’ 体内仅有5’→3’DNA聚合酶所有DNA聚合酶只能催化5’→3’方向合成3’→5’ 如何合成? 岗崎片段3′5′3?半不连续复制前导链(leading strand)5?解链方向3?5′岗崎片段随从链(lagging strand)3′5′3′5?(三)RNA引物(RNA prime)DNA聚合酶不能催化两个游离dNTP聚合需要含3’-OH引物(RNA)根据RNA聚合酶抑制物能抑制DNA合成岗崎片段5’端有RNA引物 RNA聚合酶能催化两个游离NTP聚合其产物提供3’-OH3’5’前导链5’3’5’3’岗崎片段3’随从链5’RNA引物RNA引物最后要被DNA聚合酶Ⅰ除去，空隙由 该酶补满，缺口再由DNA连接酶连接。RNA引物作用： 为DNA聚合酶提供合成核苷酸所需3’-OH 可尽量减小DNA复制起始处突变(四)复制真实性DNA半保留复制 遵守严格碱基配对规律RNA引物 尽量减少DNA复制起始处突变DNA聚合酶在复制延长中对碱基选择功能 复制出错时有即时校读功能(3’→5’外切酶功能)DNA损伤修复机制二、参与DNA复制一些酶类与蛋白质DNA复制条件底物(substrate): dATP, dGTP, dCTP, dTTP(dNTP)聚合酶(polymerase): DNA指导DNA聚合酶， 简写为DNA pol，需Mg2+模板(template): 解开成单链DNA母链引物(primer): 提供3?-OH末端使dNTP可以依次聚合 其他酶与蛋白质DNA聚合酶：Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ(原核生物) ?、?、?、? 、? (真核生物)解链、解旋酶类：DNA解链酶、单链DNA结合蛋白(SSB)、DNA拓扑异构酶Ⅰ/Ⅱ引发体DNA连接酶(一)DNA聚合酶3’3’, 5’-磷酸二酯键5’1. 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ1955年Kornberg发现了DNA聚合酶Ⅰ 简称为polⅠ，也称为Kornberg酶活性：5??3? 聚合酶活性 5??3? 核酸外切酶活性 3??5? 核酸外切酶活性DNA聚合酶Ⅰ是多功能酶切除RNA引物损伤修复校读功能聚合功能 3’→5’ 5’→3’ 外切酶 聚合酶 5’→3’ 外切酶 NC大片段(klenow片段)小片段 5? ? 3?外切酶活性 3? ? 5?外切酶活性核酸外切酶活性5′ A G C U U C A G G A U ? 3′ | | | | | | | | | | |5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | |?3′ T C G A A G T C C T A C C G A C 5′2. 大肠杆菌DNA聚合酶ⅢDNA聚合酶Ⅲ全酶2个核心酶——θαεγ-复合物——γ2δδ’χψDNA夹子——β(4个)特点 一种非常高续进性酶催化活性比DNA聚合酶Ⅰ高100倍产物真实性高?DNA聚合酶Ⅲ是DNA复制主要酶，是原核生物复制延长中真正起催化作用酶 3. 真核细胞DNA聚合酶DNA-pol ?负责合成引物(去除后填补)DNA-pol ?碱基切除修复DNA-pol ?负责线粒体DNA复制与损 伤修复DNA-pol ?、? DNA复制、切除修复(二)解旋、解链酶类DNA分子碱基埋在双螺旋内部，只有把DNA解成单链，它才能起模板作用；复制不断延伸，螺旋不断解开—解链、解旋酶类保持解开模板单链