裸鼠荷瘤实验.docxVIP

7777 7 7 7 7 接种量 要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最 高就用到 1*10 /0.2ml/site,再高也没有意义了。如果你的细胞很小， 1*10 /0.1ml 也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是 1*10 /0.1ml/site。查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条 件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。 有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。建议用 几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快， 那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。基本上一般认为比较合 适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后 10 到 15 天左右可以开始 试验。2.  开始试验时可以用于试验的动物数不少于 60~70%，而且 SD 不大于平均值的 1/3 左右。3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于 1g，并且没有溃烂。当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以 1*10 /site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。 接种部位 接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。皮下肿瘤模型中，想要成瘤 率高就接种在腋下。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要 保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺 破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头， 这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿 行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的， 针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染 的可能。 如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不 可以接种多个位点用于保证可用的模型数。因为在有些情况下，一 个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论 这几个肿瘤相距有多远。要是想多打几个部位做做预试验，倒也不 是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。 皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很 靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。注射前针头稍微 动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。一般来 说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包 的。主要靠针头稍微动一动来判断。 是否应用免疫抑制剂 裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺 （2mg 每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是 T 免 疫缺陷动物，但是人家说的 CTX 可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和 NK 细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期 很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实 践中是不是真有人这么做呢？ 楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物 免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这 么做。另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么 让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加 速，其实对实验并不好。因为造模周期短，很可能生长速度也会被 加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用 药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是 很不利的。所以一般情况下，应该尽量的复合这个瘤株本身的生长 特性，不应该过多地去加以人为的干扰。 是否用手术标本荷瘤 如果是药效试验，不建议用手术标本，因为 SFDA 的临床前研 究指导原则上明确指出要用建株的肿瘤株进行试验，因为用手术标 本的试验可重复性太差，你这个标本万一没有保存好，断掉了，你 自己都很难重复出上次的试验结果。国外的文献上看到的却很少有 人用手术标本构建模型进行试验。取材的部位：肿瘤生长活跃，状 态良好，结缔组织比较少的地方。运送途径：无菌、冰浴保温，无 菌培养液浸泡，时间不能超过 1 个小时。最好一个小时内就能够接 种到动物体内。接种部位：腋下。另外，手术标本还有一个风险： 你不能保证取得的标本一定能够顺利地成瘤并且用于试验。 注意事项 A 裸鼠的周龄,B 肿瘤细胞:何种肿瘤,接种细胞的数量(用对数生 长期的,活力高的)记数要准确,C 接种方式:注意不要漏液,否则会损失 细胞数量 D 饲养环境:要求是 SPF 条件 具体操作 1.能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关 7 7 键是你的肿瘤细胞数，一般肿瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重 点要考虑细胞数的问题，但最高不要超过 1*10 。 2.接种时间，最好在 1 小时之内完成。但在我实际操作过程中， 裸鼠的数量又多，1 小时之内根本做不完的，所以你可以预先将细 胞放在冰盒里暂为保存。效果还是不错的。 3.成瘤时间，每个肿瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周 左右应该能出来了；另外，如果你是打皮下，你要考虑是否有打到 深层组织，