灭活剂保护剂和免疫佐剂.pptxVIP

二、常用灭活剂的灭活机理与应用 (一) 灭活剂种类1、甲醛溶液： ①蛋白质 ②核酸烷基化（不加中断剂）2、烷化剂 乙酰基乙烯亚胺（AEI） 二乙烯亚胺(BEI) 缩水甘油醛 （使微生物核酸烷基化,灭活后加2%硫代 硫酸钠中断灭活）3、苯酚（石炭酸）：用于防腐， 很少用于疫苗研制4、结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂） 用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原5、β-丙酰内酯 病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用. 注意：灭活剂对人有害， 有时对皮肤粘膜有强烈刺 激性如：甲醛、β-丙酰内酯甲醛溶液：《规程》（2000）中的26种灭活疫苗 灭活机理： 灭活浓度：多数为0.1％～0.3％ 灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的； 必要时可在灭活后加入硫代硫酸钠，以中断其反应。 氨基 甲基胺 羧基 亚甲基二醇单酯 甲醛 醛基 羟基 羟基甲酚 巯基 亚甲基二醇 烷化剂（alkylating agent） 乙酰基乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘油醛灭活机制： 1. 烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。 2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而 不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。 1、乙酰基乙烯亚胺（N-acetyl ethylenimine，AEI）淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。0～4℃可保存1年，在-20℃可保存2年AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。口蹄疫病毒液: 终浓度0.05％，30℃8h, 加2％硫代硫酸钠阻断2、二乙烯亚胺（binary ethylenimine，BEI）市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月;终浓度0.02%, 加入2％硫代硫酸钠中断灭活。3、缩水甘油醛（glycidaldchyde，GDA）大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。0～4℃ 3个月含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。 4、?-丙酰内酯（?－propiolactone）又名羟基丙酸-?-内酯无色有刺激气味的液体，水溶液应密封于玻璃瓶中5℃保存水中溶解度37％，能与丙酮、醚和氯仿任意混合对皮肤、粘膜及眼有强刺激性，对动物有致癌性。病毒灭活后，能保持良好的免疫原性主要用于狂犬病灭活疫苗的制备。三、影响灭活作用的因素1、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛最常用。2、微生物种类和特性3、灭活剂浓度（一定要适合）4、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致）5、灭活时间6、灭活PH值7、有机物存在 第二节 保护剂（稳定剂）保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫苗生产、血清制备等）保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生物或细胞） ① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO) DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚 砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖 保护剂（protector）的分类分类：（根据其作用机理）——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白质等（根据其分子量大小）——高分子物质、低分子物质。（按其化学性质）——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物 一些常用的冷冻干燥保护剂?复合物 脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等糖类 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等盐类 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等醇类 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等酸类 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等聚合物 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等 分 类 保 护 剂 疫苗冻干保护剂组成1. 营养液： 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度2. 赋形剂： 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度3. 抗氧化剂： 抑制冻干制