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* * * 临床真菌学检验基本技术 临床真菌基础总论 一、真菌的基本介绍 二、真菌分类及存在形式 三、真菌的一般检查 ★一般镜检 ★常规染色 ★培养及鉴定方式 四、真菌的致病性 五、真菌的防治原则 ●真菌(fungus)属真核细胞型微生物，有真正的核，单细胞或多细胞异养微生物，不含叶绿素，大都能形成硬的多糖细胞壁，细胞壁结构较细菌简单，细胞壁含几丁质和纤维素 。 ●估计有100-150万种，分布广泛，从30000米高空—地表—海洋都有真菌的生长。 ●大多数真菌对人类是有益的，只有少数对人类有害。 一、真菌的基本介绍 二、真菌分类及存在形式 A、真菌分类从米奇里（P.A.Micheli，1729）开始，至今已有近280年的历史，这期间经过世界上无数真菌科学工作者的努力，使真菌分类的工作有了极大地发展。 B、但是由于真菌分类存在着无数困难，现有的真菌分类系统还有待进一步发展与完善（尚未有一个大家供认的系统）。 （1）、真菌的分类 1、Ainsworth（1973）分类系统 特点：成立菌物界，分2门，真菌门下分成5个亚门；取消藻状菌纲，依据鞭毛的有无划分成鞭毛菌亚门、接合菌亚门。 2、Alexopoulos Mims （1979） 分类系统 特点：成立菌物界，菌物界Myceteae、Fungi分3个门；真菌类依鞭毛的有无分2门。 3、菌物分别归属藻界、真菌界、和原生生物界的分类系统 特点：将藻界、真菌界、和原生生物界分开成三个独立的界属 二、真菌分类及存在形式 与医学有关的真菌有四个亚门 接合亚门：毛霉、根霉等 子囊霉亚门：酵母菌属、小孢子霉属等 担子霉亚门：新生隐球菌、灵芝、食用菌等 半知霉亚门：假丝酵母菌属、球孢子菌属等 最新的真菌分类 接合菌门 子囊菌门 担子菌门 壶菌门 根据菌落形态分类： 酵母菌 酵母样菌 霉菌 双相真菌 二、真菌分类及存在形式 （2）、真菌的存在形式 菌丝和孢子 A、真菌的菌丝先端为生长点，通过顶端延长而生长。菌丝生长生出分枝，使其与营养基质接触面积增大，提高吸收力。菌丝内原生质从衰老部分流向幼嫩部分，使菌丝不断伸长，这就是生长。 B、在一定条件下由生长转入发育阶段即产生繁殖体，生长与发育受环境控制，多数真菌在贫养和低温条件下转入有性阶段，少数菌在高温下转入有性阶段。还有些真菌在其不同的发育阶段，必须在不同的寄主植物上渡过，即转主寄主（现象）。 C、只要是专门生殖的细胞，正常情况下不需要两两结合就可以单个细胞发育成一个个体，这就是孢子。 菌丝的形态： 螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状、梳状等，菌丝形态有助于鉴别真菌。 孢子的形态： 有性孢子：同一个菌体或不同菌体上两个细胞融合成经减数分裂形成。 无性孢子：细胞分化或出芽形成。形态有分生孢子、叶状孢子和孢子囊孢子。 菌丝和孢子 三、真菌的一般检查 （1）、一般镜检 A、氢氧化钾法 将标本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮载液，盖上盖玻片放置5~10分钟后或直接在火焰上快速通过2~3次微加热，轻压盖玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查。先在低倍镜下观察有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态特征、大小和排列等。对于角质标本，必要时可在10%KOH溶液中，加入终浓度为40%二甲亚砜，促进其溶解。此法适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、组织、耵聍、粪便等标本的直接涂片检查。 B、胶带粘贴法 三、真菌的一般检查 （1）、一般镜检 用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟后揭下，充分展平后，直接置贴于加有一滴浮液的载玻片上此液可以是10%~20%的KOH，也可以采用乳酸酚棉蓝染液（易于观察）。该法常用于花斑癣患处的直接检查。 三、真菌的一般检查 （2）、常规染色 乳酸酚棉蓝染色 传统染色法，酵母菌细胞、菌丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色；背景为暗淡的蓝色。 过碘酸-雪夫染色（P.A.S） 在寻找真菌孢子、鉴别真菌、观看真菌结构、等方面有意义 其他染色法 六胺银法、爱先蓝（alcian blue）法、革兰氏染色法、以及特殊染色法 于洁净载玻片上，滴1-2滴乳酸酚棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘外取少量带有孢子的菌丝置于染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片(加热或不加热)，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。 乳酸酚棉蓝染色 革兰染色法 在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性等方面有意义 （真菌的简单染色也可以） 所有的真菌、放线菌均为革兰染色阳性，呈紫黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌、诺卡菌及放线