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不同基因型青花菜游离小孢子培养的几个方法分析 青花菜（ Brassica oleracea var. italica） ，俗名绿菜花。由于其营养价值高，尤其是在抗癌功能上为同类蔬菜之首，深受消费者青睐。我国青花菜品种多为国外引进，种子昂贵。为培育新的种质资源，育成优质青花菜品种，常规方法需经过杂交、回交和自交分离，选育出理想的材料常常需要好几个世代。而在青花菜育种中利用小孢子组织培养，不仅可快速得到双单倍体纯系，还可大大缩短育种年限[1-4]。自1982年至今，甘蓝型油菜小孢子培养获得胚状体后，国内外利用游离小孢子培养技术在芸薹属作物上相继取得成功[5]，1991年Takahata等[6]首次利用青花菜进行了小孢子培养，随后张德双等[7]、王春丽[1]等也在青花菜游离小孢子培养上取得了成功。虽然小孢子培养技术日趋成熟，但很多学者侧重于对小孢子胚胎发育的诱导因素进行研究，本试验以5个不同基因型的青花菜为材料，对游离小孢子培养与植株再生进行了研究，旨在完善青花菜小孢子培养技术，同时也可为青花菜的遗传育种提供新的材料。 　　1 材料和方法 　　1.1 材 料 　　供试材料由天津科润蔬菜研究所提供，供试材料于2012年10月定植于天津市科润蔬菜所，采取常规栽培管理，翌年34月植株出现花蕾后，选取主花序上的花蕾进行小孢子培养。 //html/lunwenzhidao/kaitibaogao/  　　基因型是制约小孢子发育的重要因素[10]。在相同的试验条件下，不同基因型诱导小孢子发育的频率差异很大，本研究中，基因型11J-52达2.1个，而11J-63则仅有0.5个，其他3个基因型（11J-150，11J-158，11J-173）则只有细胞膨大和部分细胞分裂，这个结果可以为青花菜游离小孢子培养提供理论依据。但是，关于小孢子培养的启动机制、微观发育机制、发育途径以及与之相关的生理生化方面的研究仍在探究过程中。 　　本试验中同时还发现高温热激可以启动小孢子分化，但是，热激又会对小孢子造成一定的伤害，这与一些研究者得出的结果相类似[11]，如何克服这一伤害，找出最适宜的高温预处理方式、处理时间与温度以增加出胚率还有待进一步研究。此外，本试验获得的再生植株均通过自然加倍所得，其可能是单倍体、多倍体及非整倍体构成的混合群体。试验中观察到的具有一字型花冠的再生植株可能是非整倍体。通过小孢子胚产生的再生植株在农艺性状上的差别与植株倍性之间的联系还有待研究。