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SFE—CO2法与SD法提取杜仲叶挥发油的设计策略 杜仲（Eucommia ulmoids Oliv.）是杜仲科杜仲属的落叶乔木，始载于《神农本草经》，列为上品，具有补中益气、强筋骨、抗衰老、降血压等功效。传统以皮入药，但由于杜仲皮生长周期长，仅以皮作为药源会使资源紧缺。现代科学研究证实杜仲叶和皮化学成分基本一致，与皮具有同等功效，可以叶代皮入药[1-5]。随着人们对杜仲叶有效成分和药理作用的研究不断深入，杜仲叶的各种药用功效逐渐为人们所重视，已成为当今药用及保健品领域开发的热点，目前已开发的产品有杜仲胶囊、杜仲平压片、杜仲壮骨丸、杜仲茶等[4]，杜仲叶将成为21世纪人类保健食品的重要植物资源之一，因此对杜仲叶药用成分进行分析具有重要意义。 　　本研究采用超临界CO2萃取法（SFE-CO2法）与水蒸气蒸馏法（SD法）两种方法对四川绵阳产杜仲叶进行挥发油提取，运用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）对其化学成分进行定性定量分析，比较二者挥发性成分的差异，以期为更好地开发利用杜仲叶资源提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 [() 专业提供和发表的服务,欢迎光临] 　　试验样品来自四川绵阳，自然晒干，经广西中医药大学药用植物教研室梁子宁副教授鉴定为杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoids Oliv.）的干燥叶。 　　1.2 仪器 　　美国HP6890/5973N气相-质谱联用仪（美国Agilent公司）；HP-5MS弹性毛细管柱（30.0 m250 mu;m0.25 mu;m）；超临界CO2萃取装置（杭州黎泵业有限公司）；挥发油提取器（自制）；LG16-W高速微量离心机（北京医用离心机厂）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 杜仲叶挥发油的提取 1）SFE-CO2法：称取四川绵阳产干燥杜仲叶100 g粉碎，过筛，置于超临界CO2流体萃取池中。萃取釜压力20 MPa，温度50 ℃；分离釜Ⅰ压力5.5 MPa ，温度40 ℃；分离釜Ⅱ压力6 MPa，温度35 ℃；萃取时间1 h，CO2流量10 L/h，得到有特殊香味的棕黄色油状物，产率为3.83%。2）SD法：称取上述杜仲叶100 g，粉碎，过筛，按固液比1∶6加入600 mL去离子水，浸泡2 h后连接挥发油提取器，加热回流5 h，收集挥发油，馏出液用乙醚萃取，无水硫酸钠干燥，回收溶剂得到少许具有特殊香味的棕黄色挥发油。 　　1.3.2 供试品溶液的制备 取上述SFE-CO2法萃取样品和SD法萃取样品各适量，分别加乙醚溶解并稀释，经无水硫酸钠干燥后得棕黄色溶液，待测。 　　1.3.3 色谱-质谱条件 HP-5MS毛细管柱（30.0 m250 mu;m0.5 mu;m）；程序升温，初始温度70 ℃，保持1 min，以10 ℃/min 升至140 ℃，保持2 min，以6 ℃/min升至190 ℃，保持2 min，再以7 ℃/min升至温度250 ℃，保持3 min；进样口温度为250 ℃；载气为高纯氦气，流量为1.0 mL/min；进样量为1.0 mu;L；分流比为10∶1。 　　质谱接口温度为280 ℃；EI电离方式，电子轰击能量70 eV；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；倍增电压 1 247 V；扫描范围45～550 amu；扫描间歇2.94 次/s；溶剂延时3 min。 　　1.3.4 杜仲叶挥发油样品的化学成分分析 按上述GC-MS条件对两种杜仲叶挥发油样品进行分析，得总离子流图，见图1和图2。所得色谱和质谱信息经计算机数据处理系统进行自动检索，通过与标准质谱图库（NIST02，Wiley275）对照和解析，对杜仲叶挥发油成分进行确认，并用峰面积归一化法计算各组分的相对百分含量，化学成分分析结果见表1。 　　2 结果与分[() 专业提供和发表的服务,欢迎光临]析 　　用SFE-CO2法和SD法提取得到的杜仲叶挥发油均具有特殊的浓郁香味，前者外观颜色为棕黄色，后者颜色略深。SFE-CO2法与SD法所得挥发油相比，收率大为提高，可达3.83%。 　　两种方法提取得到的杜仲叶挥发油样品主要化学成分差异较大。从SD法提取的杜仲叶挥发油中初步鉴定出39种成分，占挥发油总峰面积的84.48%；其中含量较高成分主要有3-呋喃甲醇乙酸酯、肉桂酸乙酯、beta;-紫罗酮、alpha;-紫罗酮、香叶基丙酮、金合欢烷、2，4-二叔丁基-4-甲基苯酚、棕榈酸、法尼基丙酮、植酮、棕榈酸甲酯、植醇等。从SFE-CO2法所得挥发油样品中初步鉴定出59种成分，占挥发油总峰面积的82.57%，其中含量较高的成分主要有右旋龙脑、肉桂酸乙酯、榄香烯、异丁子香烯、石竹烯