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NaCl胁迫处理对豇豆幼苗抗氧化酶活性的影响 摘要：主要研究150 mmol/L NaCl胁迫处理对豇豆（Vigna unguiculata Linn.）幼苗叶片抗氧化酶活性的影响。结果表明，豇豆幼苗在受到NaCl胁迫后，其叶片内可溶性蛋白含量、脯氨酸含量、丙二醛含量随胁迫时间的延长均逐渐升高，胁迫12 h后，它们的含量都达到峰值；在150 mmol/L NaCl胁迫过程中，豇豆幼苗叶片的抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）等活性在0～12 h期间逐渐上升，12 h后其活性也均达到最高值；在12～48 h胁迫期间，3种抗氧化酶活性逐渐下降，但仍强于非盐胁迫下的抗氧化酶活性。同时，对NaCl胁迫下这3种抗氧化酶基因的相对表达水平进行荧光定量分析，结果表明，SOD和CAT 等2种抗氧化酶基因相对转录表达水平与胁迫期间内相应酶的活性变化一致，而POD基因表达在胁迫6 h后就已经达到最大值，与其酶活性在12 h后达最大值是不一致的。分析结果表明，在盐胁迫下NaCl诱导了SOD、POD、CAT等 3种酶基因的表达，抗氧化酶活性相应增强，从而增强了豇豆幼苗应对NaCl胁迫的能力，为盐碱地培育豇豆作物具有一定指导意义。　　关键词：NaCl胁迫；豇豆幼苗；抗氧化酶；可溶性蛋白；脯氨酸；丙二醛；实时定量PCR　　　　土壤盐渍化是一个世界性的资源问题和生态问题，是影响农业生产的主要环境因素。盐渍土壤能通过水分胁迫、盐分离子的生理毒害等作用对作物产生危害，因此能限制作物的生长、发育，甚至造成农作物的减产或绝收。当前，全球盐碱地面积已达9.5亿 hm2，中国有1亿 hm2[1]。中国的盐渍化土地主要分布在西北和华北地区，并有逐年扩大的趋势，而这些地区是我国主要的产粮地区，植物耐盐研究已经成为当今研究的热点。　　在正常状态下，植物的光合作用和呼吸作用等代谢途径都会产生电子，电子在质膜上进行传递时会不断产生活性氧，这些活性氧包括超氧自由基（ O-2 ）、羟自由基（OH）、过氧化氢（H2O2）[2-7]。NaCl等盐非生物胁迫过程中所产生的低浓度活性氧可作为信号分子在植物的氧化还原反应中进行信号转导[8]，引起一系列的生理生化反应，并产生一定的生理抗性。而中度和重度非生物胁迫都会使植物体内产生过多的活性氧，使植物体内产生氧化胁迫[9-12]，甚至会严重破坏细胞的稳定性和正常的代谢，通常使脂质、蛋白质和核酸受到氧化损伤，从而造成细胞损伤，最终导致细胞死亡[5，13-15]。同时，NaCl等盐胁迫还会启动膜脂过氧化或膜脂脱脂作用，从而破坏膜结构，使质膜流动性增大，电解质渗出率增加，细胞内代谢毒物 （如丙二醛、MDA等）积累增多[8，16-18]。因此，活性氧参与了植物光合作用的调节、胁迫应答、病原反应、程序性细胞死亡、激素调节以及植物的生长发育等生理生化反应[5，19]。植物为了应对活性氧所引起的氧化胁迫，在进化过程中产生了一个有效的抗氧化防御系统[20]，这个防御系统主要由超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）等组成，其中SOD能清除超氧离子，POD能清除过氧化物，二者产生的过氧化氢由CAT转化成氧气和水，从而解除活性氧对植物的毒害作用[15，19，21]。因此，抗氧化酶系统是植物应对氧化胁迫的一个重要反应机制[11，21- 22]。　　豇豆（Vigna unguiculata Linn.）属于豆科豇豆属，是中国重要的蔬菜作物，在整个生长发育期对盐胁迫都很敏感。笔者发现，在0～250 mmol/L NaCl胁迫12 h后，豇豆幼苗叶片的可溶性蛋白质、脯氨酸、丙二醛含量以及抗氧化酶活性逐渐升高，在150 mmol/L时达到最大值[18]。本研究选取豇豆作为研究对象，考察150 mmol/L NaCl胁迫处理下豇豆幼苗叶片抗氧化酶活性的变化，测定丙二醛（MDA）、脯氨酸含量的变化，初步探索豇豆幼苗叶片3种抗氧化酶基因在NaCl胁迫下基因表达水平的变化，以期为今后豇豆在盐碱地栽培生产提供理论参考依据。　　1 材料与方法　　1.1 材料　　豇豆品种为翠宝198豇豆。该品种抗病性强，特耐高温，具有分枝多、肉质脆嫩、爽甜、纤维少、不易老化等特点。　　1.2 种子预处理　　将豇豆种子用1% NaClO溶液浸泡10 min，流水冲洗3～5次后吸胀12 h，于25 ℃的光照培养箱中萌发24 h，再用蒸馏水清洗萌发的种子2～3次。将萌发一致的种子播种在已灭菌石英砂中，浇上MS营养液，置于人工培养室（25plusmn;1） ℃培养，每天补充水2次。待所有幼苗的第1对真叶全部展开时，选取长势一致的幼苗，分成2组：（1）对照组，（2）NaCl等盐胁迫试验组，每组重复3次。其中对照组直接用MS培