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DNA甲基化及其在水产养殖动物中的应用研究进展 摘要：DNA甲基化是真核生物基因表达调控的重要的一种表观遗传机制。近年来，随着对水产养殖动物各领域研究的不断深入，DNA甲基化在水产养种动物遗传育种的领域引起了广泛的关注，取得了一些进展。本文简要介绍了DNA甲基化和其检测技术，并从鱼类、贝类、棘皮动物三个方面分别介绍了该技术在这三类动物上的研究进展，为今后水产养殖动物的表观遗传学研究提供参考。关键词：DNA甲基化；水产动物；研究进展DNA甲基化(DNA methylation)又称DNA的共价修饰，是重要的表观遗传( epigenetlcs inheritance)现象之一。表观遗传是指在不改变DNA序列的前提下，产生可遗传的核酸序列修饰，并得到不同的表现型。其中DNA甲基化对基因的表达有重要的调控作用，例如：DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去DNA甲基化则诱导了基因的重新活化和表达；DNA甲基化还能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。有研究证实，在发生人癌变的细胞内肿瘤细胞中癌基因DNA甲基化水平降低；抑癌基因的甲基化水平高；加之错配修复基因表达缺陷的原因不仅有基因突变，其基因启动区也呈高甲基化水平口，。在动植物研究方面越来越多的实验表明，DNA甲基化在动物、植物的生长发育中起着举足轻重的作用。通过对植物和哺乳动物DNA甲基化的比较分析，有助于我们了解RNA引导的DNA甲基化机制。在哺乳动物中，全基因组DNA甲基化和去甲基化发生在配子形成和早期豚胎学育[3]。这些过程可能涉及名个DNA甲基化或去甲基化机制。1 DNA甲基化与检测技术表观遗传学中研究最清楚、最重要的修饰形式就是DNA甲基化。它在细胞发育和运行正常功能过程中起着很多关键作用，包括基因表达调控、胚胎发育、基因组印记和染色体稳定性等（图1）。DNA甲基化的含义即在甲基转移酶的催化下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5 甲基胞嘧啶，常见于基因的5amp;acute; CG-3rsquo;序列。大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5rsquo;端的非编码区，并成簇存在。DNA甲基化具有自我永续结构（图2），其特点为甲基化等位基因复制产生的半甲基化子链，它通过组成活性甲基化酶恢复其甲基化活性状态。DNA甲基化的检测技术大致可以分为两类：特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析，后者也称为甲基化图谱分析( methylationprofiling)。特异位点的甲基化检测有以下几种重要方法：(1)甲基化特异性PCR (MS PCR)；(2)亚硫酸氢盐处理+测序；(3)联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法( COBRA)；(4)荧光定量法(Methylight)；(5)甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析；(6)焦磷酸测序。基于芯片的甲基化图谱分析一般使用的芯片有安捷伦的Human CpGIsland Microarray Kit,lllumina的HumanMethylation27 DNA analysis BeadChip, Roche NimbleGen的Human DNA Meth 2.1M Deluxe Promoter Array和Affymetrix的seven array GeneChip@ Human Tiling 2.OR Array Set。lsquo;；，还有利用将传统的甲基化工具（如DNA的亚硫酸氢盐转化）与目标基因组捕获技术和高通量测序相结合，绘制出甲基化图谱的研究方法。此外MassARRAY@ EpiTYPERrM DNA甲基化分析技术结合了碱基特异性酶切反应和MALDITOF检测原理，可实现多重CpG的分析检测，这种方法被称为飞行质谱amp;acute;。2 甲基化在养殖鱼类上的应用种群的性别决定机制决定其性别比例，是其稳定性的一个重要的种群参数，。鱼是变温（冷血）动物，其胚胎发育受物理环境的影响较大。对于某些鱼类物种，有越来越多的证据表明，温度影响性别决定r。，。有13科60多种不同的鱼类属于温度依赖型性别决定( Temperature dependentsex determination，TSD)。TSD是在基因型性别决定(Genotypic sex determination，GSD)的基础上，通过温度效应(Temperature effects，TE)实现的。温度对鱼类性别具体的影响机制大体可分为这几个方面：主要调控性别的基因[13]、睾丸决定基因、卵巢决定基因[ls，、皮质醇介导调控途径[16]和表观遗传调控途径。在这里我们着重介绍在温度调控下的DNA甲基化对鱼类性别的影响。温度的变化对欧洲海鲈鱼性别比例有较大影响。欧洲海鲈鱼为雌雄