病毒中和试验测定法.docVIP

病毒中和试验测定法 固定病毒稀释血清法(α法) 本法用于抗血清的中和价。试验需先滴定病毒毒价，试验时将其稀释成每一单位剂量含200个TCID50，再将待检血清倍比稀释加等量200个TCID50/ml的病毒液，混匀后37℃1h，每一稀释度接种24孔细胞培养板4孔，每孔0.2ml。5%C02培养箱培养一定时间后，记录出现CPE孔数，以不出现CPE数和接种数的比为中和比值。按Karber法计算中和价。其公式如下： Log TCID50=L+d（S-0.5） （TCID50用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数。d为组距，即稀释系数，在10倍系列稀释则为-1，S为各组CPE与接种数比值之和） 50%中和试验举例 血清稀释 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 稀释度对数 -1 -1.3 -1.6 -1.9 -2.2 -2.5 每一接种剂量含病毒 100TCID50或 100LD50或100EID50或100ID50 中和比值 4/4 4/4 4/4 4/4 2/4 0/4 L=-1，d=-0.3，S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=4.5 代入Karber公式：LogND50= -1－0.3*(4.5-0.5)=2.2 该抗血清ND50(半数中和单位)为10-2.2，即1/160，则其中和价为160 ND50/ml，可以简写成160。 固定血清稀释病毒法(β法) 本法用于测定抗血清的中和指数。将病毒原液10倍系列稀释，分列于2排无菌管，第一排加等量正常血清（对照组）；第二排加待检血清（中和组），混匀后，置37℃1h，分别接种细胞板孔（或鸡胚、实验动物）进行培养，记录CPE（鸡胚、动物死亡数），计算TCID50（或LD50），按下式计算中和指数。 中和组TCID50（或LD50） 中和指数= ———————————— 对照组TCID50（或LD50） 查反对数，即得该待检血清的中和指数。通常中和指数50者判为阳性，10-49为可疑，10者为阴性。例如： 对照组滴度的LD50=10-6.5 中和组滴度的LD50=10-4.5 中和指数=10(6.5-4.5)=102.0=100 中和指数的对数Log=Log100=2.0 一般来说，以10倍稀释进行滴度测定，Log10=1。因此小于10（1Log）则认为中和指数无意义，10-50之间的值（Log1-1.6）则为可疑，超过50((Log1.7)则是有意义的.