实验二大肠菌群的检验.ppt

大肠菌群的定义;大肠杆菌的定义;大肠菌群和大肠杆菌的关系;卫生学意义;大肠杆菌的生物学特性;大肠杆菌的生物学特性;大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程（FDA BAM）;大肠菌群测定——MPN法检验几点说明;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——生化鉴定;实验二大肠菌群的检验 一、实验目的 1、学习食品中大肠菌群检测程序、方法； 2、掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。 二、实验材料 1、设备和材料 温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针 2、培养基及试剂 乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（EMB）、革兰氏染色液;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;（一）最先准备的器材;（三）应制备的培养基; 蛋白胨20g、胆盐5g、乳糖10g、0.4%溴甲酚紫乙醇溶液25ml、蒸馏水1000ml（将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正PH值至7.4，加入指示剂）；或购买制好的乳糖胆盐发酵培养基、按说明配置。分装试管，每管10ml，并放入一个到气管（杜氏小管），高压灭菌115℃、15分钟。 双料乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外，其它成分加倍。 ;A.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤 A.1.1 成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 氯化钠 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4） 2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 2.75 g 月桂基硫酸钠 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6.8±0.2 A.1.2 制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。;A.2 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤 A.2.1 成分 蛋白胨 10.0 g 乳糖 10.0 g 牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液 200 mL 0.1%煌绿水溶液 13.3 mL 蒸馏水 800 mL pH 7.2±0.1 A.2.2 制法 将蛋白胨、乳糖溶于约500 mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 mL（将20.0 g脱水牛胆粉溶于200 mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 mL，用蒸馏水补足到1 000 mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。;A.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA） A.3.1 成分 蛋白胨 7.0 g 酵母膏 3.0 g 乳糖 10.0 g 氯化钠 5.0 g 胆盐或3号胆盐 1.5 g 中性红 0.03 g 结晶紫 0.002 g 琼脂 15 g～18 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.4±0.1; 蛋白胨　　　　　　 10.0g 　　乳糖 　　　　　　　10.0g 　　磷酸氢二钾 2.0g 　　琼脂　　　　　　 15.0g　　伊红γ 0.4g　　美蓝　　　　　　　0.065g  或20ml 伊红γ (20g /L)和 10ml 美蓝(6.5 g /L) 　　 蒸馏水　　　　　 1000.0mL　　最终pH7.1±0.2 (25℃) 先将蒸馏水中加入磷酸氢二钾及蛋白胨、乳糖使之溶解，后加琼脂加热溶解，再调pH=7.2-7.4,再加入伊红,美蓝水溶液, 高压灭菌115℃、15分钟。 蛋白胨提供细菌生长发育所需的氮源、维生素和氨基酸，乳糖提供发酵所需的碳源，磷酸氢二钾维持缓冲体系，伊红Y和美蓝抑制绝大部分革兰氏阳性菌的生长。琼脂是凝固剂。 大肠杆菌在EMB上发酵乳糖，形成黑色菌落，大部分有金属光泽。沙门氏菌形成无色菌落。金黄色葡萄球菌基本上不生长。 ;质控： 此培养基呈紫色，可有细微沉淀。质控菌株接种后，35℃培养18～24小时，观察结果应如下表所示： ;说明： （1