6 细菌鉴定中常用的生理生化反应概述.ppt

方法 将待检菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养 48h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。 演示课件 伏一普二氏试验(V．P．试验) 某些细菌分解丙酮酸，丙酮酸 再被分解，变为乙酰甲基甲醇；乙 酰甲基甲醇，其在碱性条件下氧化 成为二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精 氨酸胍基起作用产生粉红色的化合 物，此为VP试验。 演示课件 方法 将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h，取出，加入40％KOH 5～10滴，然后再加入等量的5％?一萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中保温15～30min，以加快反应速度。若培养物呈现红色，为伏—普反应阳性。 演示课件 靛基质(吲哚)试验 某些细菌能分解蛋白质中的色氨 酸，产生靛基质(吲哚)，靛基质与对 二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色 靛基质(红色化合物)。 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 细菌鉴定中常用的生理生化反应 演示课件 一、实验目的 1.了解细菌生理生化反应原理 2.掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法； 3.了解细菌在不同培养基中的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义 演示课件 三、实验器材 37℃恒温培养箱、接种环、酒 精灯、试管架、记号笔等 待测菌 甲基红试剂、V．P试剂、吲哚 试剂、格里斯试剂(硝酸盐利用 试验) 演示课件 培养基 糖发酵培养基，用于糖类发酵试验 葡萄糖蛋白胨水培养基，用于甲基红和V．P试验 蛋白胨水培养基，用于吲哚试验 柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体培养基，用于硫化氢试验 柠檬酸钠培养基，用于柠檬酸盐利用试验 演示课件 三、实验方法及原理 细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对 营养基质的分解能力不一样，因而代谢产物 也不一样，可用生化试验的方法检测细菌对 各种基质的代谢产物，从而鉴别细菌的种 属，称之为细菌的生化反应。 演示课件 糖(醇)类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[pH5．2(黄色)一6．8(紫色)]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。 演示课件 糖(醇)类发酵试验 （1）编号 在各试管上分别标明各种糖名称，所接种的菌名和组号，下同。 （2）接种 （3）培养 将已接种好的培养基置37℃温箱中培养24h。 （4）观察结果 演示课件 （4）观察结果： 被检细菌若能发酵培养基中的糖时，使培养基的pH降低，培养基中的指示剂为黄色； 若发酵培养基中的糖产酸产气，则培养基不仅显黄色，并且在培养基中倒置的小玻璃管(杜氏小管)中有气体。 若被检细菌不分解培养基中的糖，则培养基不发生变化。 演示课件 实验结果 糖发酵实验 演示课件 甲基红(Methylred)试验(简称MR试验) 某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸， 丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳 酸等，使培养基的pH降低到4．2以 下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。 因甲基红指示剂变色范围是 pH4．4(红色)～pH6．2(黄色)。 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件