细菌固定方法.docVIP

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2020-05-08 发布于广东
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细菌固定方法.doc

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取出样品，滴加1 mL 2.5% 戊二醛固定30 min，然后依次用0.2 mol/L 无菌PBS溶液、无菌水对样品反复冲洗2～3次，最后用2 mL无水甲醇进行脱水，通风放置直到无水甲醇挥发完毕，即得到固定细菌后的样品。以上整个过程须在生物安全柜（超净工作台）上操作。对处理后的样品，通过SEM（扫描电子显微镜）观察样品表面的细菌生长情况（SEM的操作参数：加速电压为5.0 kV，放大倍数在1,000～4,000x之间）。注意：市售的戊二醛为浓度25％的水溶液，需放冰箱4℃左右遮光保存。为了保持pH值，最好用PBS溶液稀释。戊二醛一定毒性，操作时需做好保护措施，沾到皮肤后要马上用大量水冲洗。如果需要更好的固定效果，可以用“梯度乙醇脱水法”代替无水甲醇，即依次用25％、50％、75％、100％的乙醇对样品依次脱水。附图一：SEM观察到的金黄色葡萄球菌（S.aureus），放大倍数2,000倍。附图一：SEM观察到的大肠杆菌（E.coli），放大倍数2,200倍。