第六章基因工程病毒疫苗.pptVIP

2 、亚单位疫苗设计策略 （ 1 ）抗原选择 ? 能模拟诱生有效保护性抗体应答的抗原决 定簇 ? 具有优势免疫的抗原决定簇 ? 对人体安全 ? 特异性 （ 2 ）表达载体及表达系统（按需要选择） 3 、基因工程载体疫苗的设计策略 （ 1 ）抗原选择： 同上 （ 2 ）疫苗载体的选择 选择非致病性细菌或病毒作疫苗载体。 A ：理想疫苗载体的条件： ? 感染靶细胞 ? 诱导机体产生免疫反应 ? 无毒力返祖：在不断繁殖过程中出现自身修复（毒力回复） ? 无大量排毒引起的环境污染 ? 生活史中不能与宿主染色体整合 ? 操作方便 ? 接种后不会长期在体外存留 B 常见的疫苗载体 ? 痘苗病毒载体 ? 流感病毒载体 ? Mengo 病毒载体 ? 金丝雀痘病毒载体 ? 仙苔病毒载体 ? 疱疹病毒载体 ? 沙门菌 ? 卡介苗 病毒载体 细菌载体 4 、基因缺失活疫苗的设计 ? 关键：选择要删除的靶基因，一般为复制 非必需、毒力相关的基因 5 、核酸疫苗的设计策略 基因选择：主要保护性抗原基因 分子佐剂：增强核酸疫苗激发免疫应答反应 的细胞因子 表达载体：表达抗原能力强的载体（启动子、 增强子、 polyA 信号 二、基因工程疫苗制备的技术路线 1 、基因工程亚单位疫苗制备的技术路线 ① 抗原基因选择与分离 ② 构建重组载体 ③ 转化宿主（细胞） ④ 表达、纯化 2 、基因工程载体疫苗制备技术路线 ① 抗原基因选择与分离 ② 插入疫苗载体系统（细菌或病毒） ③ 重组载体体外培养 ④ 收获培养物及后处理 3 、基因缺失活疫苗制备技术路线 ① 选择靶基因 ② 定向缺失靶基因 ③ 基因缺失毒株的培养 ④ 收获病毒及后处理 4 、核酸疫苗制备技术路线 ① 目的抗原基因的选择与分离 ② 构建表达质粒 ③ 转入宿主细胞扩增 ④ 纯化重组质粒 ⑤ 后处理 三、基因工程病毒疫苗的质量控制 （ 1 ）注意：抗原基因、表达载体的变异和稳 定性 ? 安全要求：重组后的基因产物无致病性、 无毒性、无潜在危险 ? 有效性要求：保证表达后的蛋白具有良好 的抗原性和免疫原性 ? 稳定性和重复性要求：同样的方法可以重 复生产和制造 （ 2 ）研制阶段的要求： 插入基因：所有的背景清楚、克隆过程清楚 载体：背景（启动子、复制子、抗药性等） 清楚 宿主细胞：背景（来源、表型、遗传型及相 应的标记基因）清楚 第四节 基因工程病毒疫苗的研发现状 一、需研制的基因工程病毒疫苗 艾滋病 乙型肝炎 丙型肝炎 戊型肝炎 EBV 肝炎 人乳头瘤病毒（宫颈癌） 单纯疱疹病毒 巨细胞病毒 呼吸道合胞病毒 轮状病毒 登革热病毒 埃博拉病毒 二、重要病毒性疾病基因工程疫苗的研究进展 1 、艾滋病疫苗（ AIDS ） ? 艾滋病全称“获得性免疫缺陷综合症 (acquired immunodeficiency syndrome )” ，简称 AIDS 。 1981 年，首例艾滋病病例在美国同性恋人群中发 现。 ? “人类免疫缺陷病毒 (Human Immunodeficiency virus ， HIV)” 并确定艾滋病 是由这种逆转录病毒 (retroviruses) 所引起。 基因工程病毒疫苗 苏州大学 医学部 贡成良 第一节 疫苗概述 一、疫苗的起源与发展 1 、起源阶段 Dr Edward Jener （ 1796 ）： 用一种奶牛痘感染人类，感染后不再被天花感染。 Louis Pasteur （ 19 世纪末）： 研制成功狂犬疫苗。 1978 年世界卫生组织宣布，人类消灭了天花。 Salmon Smith 伤寒细菌灭活疫苗 . Chamberlai Roux 霍乱、鼠疫灭活疫苗 爱德华首先采用接种牛痘预防天花 一、疫苗的起源与发展 2 、发展阶段 （ 1 ） 20 世纪前 30 年 卡介苗（ BCG ）：结核菌减毒苗 白喉 / 破伤风疫苗：化学灭活疫苗 流感疫苗：禽胚中研制成功 （ 2 ）二次世界大战后： 多种减毒和灭活病毒疫苗研制成功：脊髓灰质炎疫 苗、腮腺炎疫苗、麻疹疫苗、风疹疫苗以及脑膜 炎球菌、肺炎球菌、流感杆菌疫苗 一、疫苗的起源与发展 3 、 20 世纪 80 年代（分子技术推动的疫苗研制） ? 重组乙肝疫苗 ? 细菌荚膜与载体蛋白偶联疫苗 ? 细胞培养生产减毒或灭活疫苗 4 、我国的情况 ? 北京、上海、兰州、成都、长春、武汉生物 制品研究所 ? 实现计划免疫接种 二、疫苗与基因工程疫苗 1 、疫苗（ Vaccine) （ 1 ）传统的定义： ? 用人工变异或从自然界筛选获得的减毒或 无毒的活的病原微生物制成的制剂，或者 用理化方法将病原微微生物杀死制备的生 物制剂，用于人工自动免疫，使人或动物 产生免疫能力。 二、疫苗与基因工程疫苗 2 、现代定义