平面色谱法原理和分类介绍.pptVIP

* 展开 展开器皿 使用的器皿一般为长方形密闭玻璃缸，称为层析缸或色谱缸。 展开方式 常用上行法，另外还有下行法、径向展开、多次展开 、双向展开。 * 展开过程中注意溶剂蒸气饱和 边缘效应 同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的Rf值小，这种现象称为边缘效应。 产生原因 防止边缘效应 密闭容器，先用溶剂蒸气饱和。 * 显色—斑点的定位 有色物质 日光下观察 有紫外吸收 紫外灯下观察 在荧光背景下呈现暗斑 无色物质 喷洒显色剂 * 四、定性和定量分析 定性分析－ Rf值 定量分析－ 洗脱法 　　　　　　 直接定量法 目视比色法 薄层扫描法 * 五、高效薄层法 高效薄层色谱法（high performance thin layer chromatography；HPTLC） 是在现代色谱理论指导下，以经典薄层色谱法为基础发展起来的一种新型薄层色谱技术。 * 特点 分离效率高 分析速度快 检测灵敏度高等特点 高效薄层色谱法与经典薄层色谱法比较见表18-2 * 六、薄层扫描法 用一定波长的光束照射展开后的薄层板，测定薄层色谱斑点的吸光度A（或荧光强度F）随展开距离l的变化，所记录的A～l（或F～l）曲线称为薄层色谱扫描图，利用薄层扫描图进行定量及定性分析的方法成为薄层扫描法。 * 薄层吸收扫描法 透过法与反射法 单波长法和双波长法　 * 测定波长的选择 常采用双波长法　λs 选用被测组分的最大吸收波长，λR选用不被被测组分吸收的波长（薄层板的空白吸收）。由于从测量值中减去了薄层本身的空白吸收，所以在一定程度上消除了薄层不均匀的影响，使测定结果准确度提高。 * 反射法测定 测光方式可分为透射法及反射法 透射法比反射法强度大，但受外界条件的影响较大，使用上受到限制。因此常用反射法 * 扫描方法 线形扫描　快速，但在斑点不规则和浓度不均匀时测量误差较大。 　 曲折形扫描　适用于形状不规则及浓度分布不均匀的斑点。 * 散射参数的选择 由于吸光度与斑点中组分的量不成线性，即不遵守比耳定律，故校正曲线成弯曲状，需要将其校正为直线。 曲线校正是将散射参数和处理方法存入计算机，计算机根据适当的修正程序，自动进行校正给出符合一定线性关系的数值，从而得到一定线性的定量工作曲线 硅胶薄层板一般选３，氧化铝薄层板选７。 * 薄层色谱扫描法的定量分析 外标法 内标法 归一化法 * 外标两点法定量 * 七、薄层色谱的应用及实例 广泛应用于各种天然和合成有机物的分离和鉴定，有时也可用于小量物质的精制。 药品质量监控，可用于测定药物的纯度和检查降解产物。 在生产上可用于判断反应终点，监视反应过程。 对中药和中成药，薄层色谱鉴别应用广泛，可鉴别有效成分，进一步进行含量测定。 * 实例 判断合成反应进行的程度—盐酸普鲁卡因合成过程 药品的鉴别和纯度检查—硫酸长春碱的杂质检查 天然药物的鉴别和定量测定—六应丸中有效成分的定性和定量 * 第三节 纸色谱法 一、分离原理 纸色谱法（paper chromatography）是以纸为载体的平面色谱法。纸色谱法分离原理属于分配色谱的范畴。与薄层色谱相同，纸色谱也常用比移值Rf来表示各组分在色谱中位置。 * 纸色谱中化合物在两相中的分配系数与化合物的分子结构及流动相种类和极性有关，纸色谱属于正相分配色谱。 当流动相一定时，化合物的极性越大或亲水性越强，分配系数越大，Rf值越小；反之亦然。当化合物一定时，流动相极性越大，化合物分配系数越小，Rf值越大。 * 三种六碳糖的Rf值 六碳糖 羟基数目 溶剂系统 正丁醇-水Rf 正丁醇-酸-水 (4:1:5) Rf 乙酸乙酯-吡啶-水 (25:10:35) Rf 葡萄糖 5 0.03 0.17 0.10 鼠李唐 4 0.27 0.42 0.44 洋地黄毒糖 3 0.58 0.66 0.88 * 二、纸色谱法的实验条件 色谱纸的选择 固定相 展开剂的选择 * 平面色谱法原理和分类介绍 plane chromatography * 色谱分类 GC LC SFC 柱色谱 平面色谱 HPCE 薄层色谱 纸色谱 薄层电泳 * 概述 平面色谱法是在平面上进行分离的一种色谱方法 是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法 * 特点： 方便、快速、成本较低，易于推广 样品的预处理比较简单 应用范围广 展开剂选择范围宽 * 历史简介 1938年，俄国人Izmai