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食品卫生微生物学检验大肠菌群计数培训 大肠菌群计数大肠菌群定义：一群在36℃条件下培养24~48小时能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属等的细菌检验比较简单，所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加工卫生状况的通用指标大肠菌群计数第一法 MPN法第二法 平板计数法第三法 Petrifilm测试片法大肠菌群计数：第一法 与原4789.3的不同l 操作步骤不同原方法现方法初发酵LST初发酵EMB分离培EMB分离培养BGLB验证染色，复发酵报 告报 告大肠菌群计数：第一法 与原4789.3的不同l 初发酵培养基不同原方法：乳糖胆盐肉汤现方法：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤LST肉汤 是国际上通用的培养基。与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性，LST中的选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，相对于胆盐稳定性更好些。 还有就是LST更容易观察。大肠菌群计数：第一法 大肠菌群计数：第一法 大肠菌群计数：第一法 与原4789.3的不同l 结果报告单位不同原方法： MPN / 100g(mL)现方法： MPN / g(mL)大肠菌群计数：第一法 与原4789.3的不同l 给出的MPN表不同l 标准名称不同 大肠菌群计数：第一法 大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体食品：以无菌操作取25g）样品,放入装有225 mL生理盐水的无菌均质杯内,于8000 r/min均质1min～2min,制成1:10样品匀液，或放入225 mL生理盐水的无菌均质袋中，用均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.1.2 液体食品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)中,以30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。6.1.3 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl予以调节。 大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.4 用1mL无菌吸管或移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入装有9mL生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打3～5次，或采用振荡器使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 6.1.5 根据对样品污染情况的估计,按上述操作，依次制成系列十倍系列样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。 大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤6.2 初发酵实验 对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤6.3 复发酵实验 用直径为3mm的接种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中，置36℃±1℃温箱内，培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 大肠菌群计数：第一法 大肠菌群计数：第一法 大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤6.4 结果报告 根据大肠菌群阳性管数, 查MPN检索表，报告每 g (mL)样品中大肠菌群的MPN值 。 经过和标准起草人沟通，此方法标准的单位可以乘以100，最终报出MPN/100g(100mL)。阳性管数MPN95%置信区间阳性管数MPN95%置信区间0.100.010.001低高0.100.010.001低高0003.0--9.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.6941003.60.171830138821.3183026417180102113.6383104391801107.41.3203117517200111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221