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巧克力培养基配制标准操作规程
1．目的
规范巧克力培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。
2．原理
流感嗜血杆菌生长依耐血液中的X及V因子，当培养基加热至80～90℃时，可使血液中的红细胞破裂释放出X及V因子，以利用嗜血杆菌的生长培养。
3．用途
主要用于嗜血杆菌的分离培养，亦可用于奈瑟菌的增值培养。
4．配方
牛肉浸出液1000ml、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂5g、无菌脱纤维羊血100ml，pH7.2～7.4。
5.操作步骤
将前4项成分混合，加热溶化，校正pH，121℃高压灭菌15分钟，冷却至80～85℃，以无菌技术加入羊血，摇匀后置80～85℃水浴中，维持15分钟，使之成巧克力色取出，倾注平板，待凝固后冷藏备用。
6.储存条件
2～8℃冰箱。
7.有效期
实验室自行规定，确保培养基质量。
8. 质量控制
8.1 质控频度 每次新配制时做质控
8.2 质控方法及结果见表5-19.
表5-18 配制巧克力琼脂培养基质量控制方法及结果
试验
方法
结果
无菌试验
生长试验
平行试验
100块抽检5%，100块随机取10块，35℃，CO2培养24～48小时
流感嗜血杆菌ATCC10211，35℃，CO2培养18～24小时
奈瑟氏菌ATCC43069，35℃，CO2培养18～24小时
做质控时，取新旧批号的培养基同时做
无细菌生长
生长
生长
9.注意事项
水浴温度不宜过高，时间不宜过长，否则X和V因子消耗殆尽；水浴温度也不宜过低，时间也不宜过短，否则X和V因子不能充分释放出来，应控制在80～85℃。
参考文献
[1] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007
[2] 王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999
（周庭银）
编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：
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