水产药物抗菌作用测定研究进展_图文.docVIP

５８ 《渔业现代化）２００７年第ｌ期 水产药物抗茵作用测定研究进展 郑天伦 （浙江省水产技术推广总站，杭州３１００１２） 目前对水产养殖动物细菌病进行控制的主要手段是采用抗菌药物治疗¨’２０。但由于对病原 学、药理学等方面认识不全面，在养殖过程中存在高剂量多种药物混合使用等滥用、乱用药物现象， 虽然对杀灭病原菌有一定的效果，但毒副作用明显，长期使用，易导致病原微生物产生抗药性。因 此，在使用药物治疗细菌陛疾病之前，必须测定该 药物对病原菌的抗菌作用。综述水产药物抗菌作用测定的最新研究进展：１ 药物抗菌作用测定方法 药物的抗菌作用，一般来说是指某种药物对 微生物病原菌的生命活动所产生不良影响和作用的结果。这种不良影响和作用的结果，最显著的 表现就是影响病原菌的生长、繁殖以至于杀死病原菌。一种药物是否具有抗菌作用，其抗菌作用是强是弱，可以通过药物敏感试验来测定。目前， 水产养殖中的药物敏感试验包括定性试验和定量试验两大类＂’４１。 １．１ 定性试验 定性试验通常采用琼脂扩散纸片法【３Ｊ，即将 待试菌液均匀涂布于普通营养琼脂（或其它适宜培养基）平板表面，然后将含药纸片平放在平板上，于３７℃（或其他适宜温度）恒温培养１８～ ２４ ｈ。取出平板，测量各纸片周围的抑菌圈直径。 根据抑菌圈的大小，得出药物敏感试验的结果。这是目前研究中最常用的方法ｂ。１１．２定量试验 药物抑菌定量试验的结果一般采用最小抑菌浓度（Ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＩＣ）或者 最低杀菌浓度（Ｍｉｎｉｍａｌ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ＭＢＣ）来表示”Ｊ。ＭＩＣ（或ＭＢＣ）的测定方法有琼脂扩散纸片法、牛津杯法、倍比稀释法以及仪器法 基金项目：浙江省科学技术厅科技计划项目（２００５Ｃ３２０１５） 等。还有的学者采用最小抑菌时间（Ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎ． ｈｉｂｉｔｏｒｙ ｔｉｍｅ，ＭＩＴ）来表示药物的抑菌能力ｏ¨。 １．２．１琼脂扩散纸片法 上述定性试验中，如果将纸片制成分别含不同浓度的待试药物，再根据试验结果，具有抑菌作 用的含药物浓度最低的纸片的药物浓度，即为药物对该细菌的ＭＩＣ值。再培养４８ｈ，仍具有抑菌圈的最低浓度为其ＭＢＣ值。１．２．２牛津杯法 原理同琼脂扩散纸片法，区别在于用牛津杯 代替了纸片。即将无菌牛津杯置于涂有菌液的平板之上，然后分别加入不同浓度的待试药液，再根 据试验结果，具有抑菌作用的含药物浓度最低的牛津杯的药物浓度，即为药物对该细菌的ＭＩＣ 值。再培养４８ｈ，仍具有抑菌圈的最低浓度为其 ＭＢＣ值。 １．２．３倍比稀释法 最常用的是两倍稀释法∞Ｊ。先将药液加入 事先制好的无菌肉汤培养基，使其成为两倍系列 递减浓度药液培养基，然后分别加入一定体积的菌液，在适宜的恒温条件下培养２４ｈ后，仔细观察细菌的生长情况。从无菌生长的各管中找出药物浓度最低的培养管，其药物浓度即为最低抑菌浓度。再培养４８ｈ，仍无菌生长的最低浓度为其ＭＢＣ值。１．２．４仪器法 目前，不少的细菌鉴定仪器都具有药敏试验功能，例如法国生物梅里埃的ＶＩＴＥＫ系列全自动细菌鉴定仪。只要根据产品说明书，选择不同的 药敏试卡，可以很方便地测定药物对细菌的ＭＩＣ值。仪器法操作简便，结果准确，但成本较高。 １．２．５ ＭＩＴ测定 ＭＩＴ的测定方法基本上与ＭＩＣ相同，区别在于测ＭＩＣ时，培养时间是一定的，主要观察不同 　 万方数据 《渔业现代化）ｚ００７年第１期 ５９ 浓度药物对被试菌的抑制作用；而测ＭＩＴ时，药 物的浓度是不变的，主要观察不同时间被试菌的 存活率‘７ｌ。 １．３ 联合抗菌作用测定 不同药物联用可能会有四种结果：协同作用、 累加作用、无关作用或者拮抗作用。在研制和开 发水产抗菌药物的过程中，为了增强抗菌药物的抗菌效果，常常需要进行两种或两种以上抗菌药 物复方制剂的筛选，选出具有协同作用或者累加 作用的药物组合，故需要进行药物的联合抗菌作用测定。测定联合抗菌作用的常规方法有琼脂扩散纸片法和两倍稀释法伟Ｊ。 ２影响药物抗菌作用测定的因素 ２．１ 温度 温度主要通过影响细菌的代谢和生理以及遗 传而影响测定结果一Ｊ。每一种细菌都有其最适 生长温度范围，在不同温度条件下，其生长率不同，则抑菌圈大小不同。徐宝梁等ｕ刨在测定壮观 霉素灵敏度的影响因素时发现，２０℃时的抑菌圈 直径要大于２６℃。抗菌药物要产生作用，必须先 穿透细胞，到达他们的代谢目标，而这一系列中的 每一步都可能不同程度地受到温度的影响［９］。Ｄｕｎｎｉｃｋ等¨¨在肠杆菌中观察到，膜的化学组成， 即磷脂的比例，会根据温度而改变，从而影响到细菌对抗菌药的敏感性。王志强等¨２１研究了五种 氟喹诺酮类药物分别在１２℃、２８℃对嗜水气单胞菌及温和气单胞菌的作用，结果２８℃时药物的ＭＩ