碱水解法乳脂肪的测定.docxVIP

《畜产品检测技术》电子教材 碱水解法对乳中脂肪的测定 一、原理 用无水乙醚和石油醚抽提样品的碱（氨水）水解液，通过蒸馏或蒸发去除溶剂，测定溶于溶剂中的抽提物的质量。 二、试剂和材料 1．试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。 淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg 氨水（NH3·H2O）：质量分数约25% 注：可使用比此浓度更高的氨水 乙醇（C2H5OH）：体积分数至少为9 5% 无水乙醚（C4H10O） 石油醚（CnH2n+2）：沸程为30℃~60℃ 刚果红（C32H22N6Na2O6S2） 盐酸（HCl） 碘（I2） 2．试剂配置 （1）混合溶剂：等体积混合乙醚和石油醚，现用现配。 （2）碘溶液（0.1 mol/L）：称取碘12.7 g和碘化钾25 g，于水中溶解并定容至1 L。 （3）刚果红溶液：将1 g刚果红溶于水中，稀释至100 mL。 注：可选择性地使用。刚果红溶液可使溶剂和水相界面清晰，也可使用其他能使水相染色而不影响测定结果的溶液。 （4）刚果红溶液：将1 g刚果红溶于水中，稀释至100 mL。 注：可选择性地使用。果红溶液可使溶剂和水相界面清晰，也可使用其他能使水相染色而不影响测定结果的溶液。 三、仪器和设备 1．分析天平：感量为0.000 1 g 2．离心机：可用于放置抽脂瓶或管，转速为500 r/min~600 r/min，可在抽脂瓶外端产生80 g~90 g的重力场。 3．电热鼓风干燥箱。 4．恒温水浴锅 5．干燥器：内装有效干燥剂，如硅胶。 6．具塞磨口锥形瓶：250 mL 7．抽脂瓶：抽脂瓶应带有软木塞或其他不影响溶剂使用的瓶塞（如硅胶或聚四氟乙烯）。软木塞应先浸泡于乙醚中，后放入60℃或60℃以上的水中保持至少15 min，冷却后使用。不用时需浸泡在水中，浸泡用水每天更换1次。 注：也可使用带虹吸管或洗瓶的抽脂管（或烧瓶），但操作步骤有所不同。接头的内部长支管下端可成勺状。 四、分析步骤 1．试样碱水解 （1）巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳 称取充分混匀试样10 g（精确至0.000 1 g）于抽脂瓶中。加入2.0 mL氨水，充分混合后立即将抽脂瓶放入65℃±5℃的水浴中，加热15min~20min，不时取出振荡。取出后，冷却至室温。静置30s。 （2）乳粉和婴幼儿食品 称取混匀后的试样，高脂乳粉、全脂乳粉、全脂加糖乳粉和婴幼儿食品约1 g（精确至0.000 1 g），脱脂乳粉、乳清粉、酪乳粉约1.5 g（精确至0.000 1 g），其余操作同（1）。 其中，不含淀粉样品加入10 mL65℃±5℃的水，将试样洗入抽脂瓶的小球，充分混合，直到试样完全分散，放入流动水中冷却。含淀粉样品需将试样放入抽脂瓶中，加入约0.1 g的淀粉酶，混合均匀后，加入8 mL~10 mL 45℃的水，注意液面不要太高。盖上瓶塞于搅拌状态下，置6 ℃±5℃水浴中2 h，每隔10 min摇混1次。 为检验淀粉是否水解完全可加入2滴约0.1 mol/L的碘溶液，如无蓝色出现说明水解完全，否则将抽脂瓶重新置于水浴中，直至无蓝色产生。抽脂瓶冷却至室温。其余操作同（1）。 （3）炼乳 脱脂炼乳、全脂炼乳和部分脱脂炼乳称取约3 g~5 g、高脂炼乳称取约1.5 g（精确至0.000 1 g），用10 mL水，分次洗入抽脂瓶小球中，充分混合均匀。其余操作同（1）。 （4）奶油、稀奶油 先将奶油试样放入温水浴中溶解并混合均匀后，称取试样约0.5 g（精确至0.000 1 g），稀奶油称取约1 g于抽脂瓶中，加入8 mL~10 mL约45℃的水。再加2mL氨水充分混匀。其余操作同（1）。 （5）干酪 称取约2 g研碎的试样（精确至0.000 1g）于抽脂瓶中，加10 mL 6 mol/L盐酸，混匀，盖上瓶塞，于沸水中加热20 min~30 min，取出冷却至室温，静置30 s。 2．抽提 （1）加入10 mL乙醇，缓和但彻底地进行混合，避免液体太接近瓶颈。如果需要，可加入2滴刚果红溶液。 （2）加入25 mL乙醚，塞上瓶塞，将抽脂瓶保持在水平位置，小球的延伸部分朝上夹到摇混器上，按约100次/min振荡1 min，也可采用手动振摇方式。但均应注意避免形成持久乳化液。抽脂瓶冷却后小心地打开塞子，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶。 （3）加入25 mL石油醚，塞上重新润湿的塞子，按（2）所述，轻轻振荡30 s。 （4）将加塞的抽脂瓶放入离心机中，在500 r/min~600 r/min下离心5 min，否则将抽脂瓶静置至少30 min，直到上层液澄清，并明显与水相分离。 （5）小心地打开瓶塞，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶。 如果两相界面低于小球与瓶身相接处