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; 本课题学习目标;基础知识(一) 凝胶色谱法(分配色谱法);4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程;凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示; (二)缓冲溶液; (三) 电泳:;血液;血红蛋白; 二、实验操作;初次离心后的结果;3次洗涤后的结果;(2)血红蛋白的释放:;(3)分离血红蛋白溶液:;(4)透析:;透析过程动画演示;利用透析袋透析;凝胶色谱操作:;(2)凝胶色谱柱的装填;装配好的凝胶柱; ;(3)样品加入与洗脱;(3)样品加入与洗脱;收集得到的纯化后的蛋白;思考下面的问题:;(三)SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳; 观察你处理的血液样品离心后是否分层(见教科书图5-18),如果分层不明显,可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,也得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度。; 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话,能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离的效果不好,这与凝胶色谱柱的装填有关。
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