生物选修3基因工程操作程序.pptxVIP

§1.2 基因工程的基本操作程序;;;真核细胞的 基因结构;;;一、目的基因的获取;(一)从基因文库中获取目的基因;;2.基因组 文库的构建;反转录法;哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？;PCR技术扩增目的基因;① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ;⑥过程：;(三)直接人工合成;从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成;1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。;;5.基因表达载体的组成：;基因表达载体的构建;转化 ——;1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍 （2）原理及适用范围;2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： ; 1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。;　受体细胞中真正摄入了含目的基因的重组质粒很少，必须将它从中检测出来。利用标记基因（抗生素抗性基因）进行筛选。过程如下：; 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;检测—;DNA分子杂交示意图 ;①从人体中克隆出胰岛素基因的编码序列(cDNA); ②将cDNA前接上在大肠杆菌质粒中，构建成一个表达载体（含四环素抗性基因）; ③将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中,然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌.若表达载体未进入大肠杆菌,会因无抗四环素基因而死亡;若培养基上长出大肠杆菌,说明胰岛素基因已进入了大肠杆菌中; ④培养含有胰岛素基因的大肠杆菌,收集菌体,破碎后从中提取人的胰岛素.;1. 目的基因的获取 ①从基因文库中获取 (建库的方法：直接分离法、反转录法、根据已知氨基酸合成DNA法) ②利用PCR技术扩增 ③化学方法人工合成 2. 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 3. 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法（植物）、显微注射技术（动物）、微生物 4. 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定：抗性鉴定、功能活性鉴定;1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来;2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA;3）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶;4）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达