实验六 血凝和血凝抑制试验.pptVIP

血凝和血凝抑制试验 一、实验目的 掌握血凝和血凝抑制试验的原 理和操作方法，能够正确判定试验 结果并对结果进行分析。 二、血凝试验 （ HEMAGGLUTINATION, HA ） ? 血凝现象： 有些病毒可凝集某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和 人的红细胞 (RBC) ? 原理： 血凝素与 RBC 表面相应受体结合，引起 RBC 凝集， 用以测定病 毒的含量 HA 试验的原理示意图 ? 用途： ①确定病毒的含量； ②计算病毒的血凝价，为血凝抑制 试验做准备 ? 血凝价： 能使血球产生 50% 凝集的病毒最 高稀释度 ? 血凝单位 试验材料 ? 鸡新城疫病毒 ? 鸡红细胞 ：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，用生理盐水洗涤 3-5 次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配成 1% 红细胞悬液 备用 ? 灭菌 0.85% 生理盐水 ? 96 孔 U 型微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头 操作步骤 1. 在血凝板第一排的 1-12 孔加入 50UL 生理盐水。 2. 在第 1 孔中加入 50UL 病毒，混匀后吸 50UL 到第 2 孔， 如此 倍比稀释 直到第 10 孔，混匀后弃 50UL ；最后 两孔（ 11 、 12 ）为红细胞对照。 3. 将 1% 的红细胞轻轻摇动混匀，在 1-12 孔中每孔加 入 50UL 。 4. 手工震荡， 37 ℃静置 30MIN ( 室温 40 分钟 ) 后观 察结果 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 （ C ） 1 2 （ C ） 生 理 盐 水 （ μ l ） 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 病 毒 悬 液 （ μ l ） 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 / / 1 % 红 细 胞 （ μ l ） 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 弃 5 0 μ l 结果判定 血凝价 A:2 6 B:2 5 C:2 2 D:2 7 A B C D 以 50% 的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作 为该病毒液的红细胞凝聚效价，即 一个血凝单位 。 血凝价 : 1:256 三、血凝抑制试验 （ HemagglutinationInhibition, HI ） ? 原理： 抗体与血凝素结合，封闭血凝素， 使之不能与红细胞结合 HI 试验的原理图 ? 用途 : ① 用于检测血清中抗体含量 ； ②鉴定病毒的型、亚型； ? 血凝抑制价： 能完全抑制血球凝集的最高血 清稀释度即为该血清的血凝抑制价 试验材料 ? 4 个血凝单位鸡新城疫病毒 ? 鸡红细胞 ：同上 ? 被检血清 ( 采自被检鸡的血清 ) ? 灭菌 0.85% 生理盐水 ? 96 孔 U 型微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头