PCR污染防治手册.docVIP

· Word资料 PCR污染防治手册 为什么要如此重视防治PCR污染？ 聚合酶链反应(polymerase?chain?reaction,?PCR)是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。扩增过程中，扩增的DNA产量是呈指数上升的。PCR产物的浓度一般为1013拷贝/ml，而1mg人基因组DNA才含1.4*106拷贝的单拷贝基因片段，因此使得PCR扩增反应的敏感性非常高。正是由于PCR反应具有强大的扩增效率也导致其及易污染，极微量的PCR产物污染便可导致假阳性结果。在应用HPV分型试剂盒的过程中，主要存在两个污染源：1.标本间的交叉污染； 2.PCR扩增产物的污染。其中以第二个污染源为最为常见，通过下面一个例子便可认识到PCR产物污染的严重性。在100ml的反应管中可产生1012拷贝个分子，若将这些分子在一个标准奥林匹克游泳池（50m*25?m?*2m）稀释后，0.1?ml稀释液含有400拷贝的扩增分子，远远超过了PCR扩增反应检测数个拷贝的极限。因此，一定要注意产物残留污染的问题，对临床实验室尤应如此。 PCR污染的来源 对于HPV分型检测试剂盒来说，污染的来源主要是PCR扩增产物的污染，常见的污染途径有两种，一是气溶胶污染，在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反