郭永龙——纤维素酶动力学研究.docVIP

纤维素酶动力学研究 姓名：郭永龙 班级：生物 08 班 学号：200807242 指导老师：蔡亚东 2011 年 7 月 21 日 纤维素酶动力学研究 一，纤维素酶的研究背景 纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，该酶在食品、医药、 轻工、 环保等领域的应用日益剧增，前景广阔。通过对产酶机理影响因素的研 究，可确定这些因素在产酶过程中的变化趋势及对产酶的影响作用，从而指导生 产工艺。虽然这方面文献报道较多，但大部分以纯纤维素为底物，如 Arthur 以 微晶纤维为底物，有的还添加了商品β- 葡萄糖苷酶 ,其实际应用价值受到了限 制。本文报道以不脱木质素的植物纤维原料为底物，制备纤维素酶过程中各因素 的变化规律，为木质纤维素的生物利用提供依据。 1995 年，Campbell 和 Laherrere 对现有的石油储备以及未开发的石油进行 估计后认为，2010 年以前天然油的产量将开始下降，到 2050 年全球每年的石油 供应量将从目前的 25 亿桶下降到 5 亿桶 。随着石化燃料由于短缺变枯竭,能源 是人类面临的共同问题。寻找新的能量来源关系到经济的可持续发展乃至人类的 生存问题。纤维素与石化燃料不同,它是一种可再生的资源。 地球上每年光合作用可产生大于 100 亿吨的植物干物质，其中一半以上是纤 维素和半纤维素。另外，人类活动产生的废弃物中也含有大量的纤维素，如农业 废物(稻草、稻壳、麦杆、花生壳、玉米芯、棉籽壳、甘蔗渣等)、食品加工废物 (果皮、果渣等)、木材废物(木屑、树皮)以及城市废弃物( 40%一 60% 固体废物 是垃圾和废纸)等。如果能有效地利用生物转化技术将这些纤维素转化成简单糖 再发酵产生乙醇等能源物质，不仅可以变废为宝，而且还可以避免由于化石燃料 燃烧所带来的环境污染，更重要的是可以缓解或解决石化能源短缺乃至枯竭所带 来世界性能源危机。纤维素酶的特异性高，反应条件比较温和，可避免化学转化 所导致的环境污染等，是将这些纤维素物质转化成简单糖的关键。因此,在再生 能源利用方面具有很广阔的应用前景。另外,自然界中细菌、真菌、某些无脊椎 动物，直至高等植物中都有纤维素酶的存在，因此，纤维素酶的研究还具有普遍 的生态意义 。 1 动物内源性纤维素酶的存在 纤维素酶广泛的存在于微生物、植物中已是不争事实。一些真菌和细菌体内 具有复杂的纤维素水解系统，可以有效地水解纤维素，如梭状芽抱杆菌 ( czostrijiu mtermocezzum )中有多纤维素酶体。在植物中，纤维素酶在植物 发育的不同阶段发挥着水解细胞壁的作用,如果实成熟、蒂柄脱落等过程。对于 动物来说，最初，普遍的观点认为动物自身不含有纤维素酶，那些食木性的节肢 动物以及草食性动物之所以可以以植物为食物来源，是因为其体内含有大量可以 水解纤维素的共生菌的缘故，它们对纤维素的消化主要是依靠其消化道内共生的 微生物、原生动物完成的。这一理论最初由 Cleveland 于 1924 年提出。他在研 究白蚁(Retie uli temes flavipes )时发现，去除后肠中原生动物的白蚁不能 存活。在此后很长一段时间里,人们就用这一理论来解释高等动物为何能消化纤 维素，而之后的很多研究也证明了除了动物消化系统中的原生动物外，其共生的 细菌和真菌也能产生纤维素酶。 1 随着对纤维素酶研究的深入,这一理论受到了挑战。1963 年，Marshall 等在 蜗牛(Helixpomaria)无菌的肝胰腺中检测到了纤维素酶和几丁质酶活性，而且还 发现其消化液中纤维素酶和几丁质酶的活性与消化液中菌体的含量无关。此外, 还有研究结果表明，高等动物体内很可能存在内源性的纤维素酶，如将白蚁(Leuc otermes speratus)暴露于较高温度中能大大减少其肠道微生物的数量，但同时 肠道中纤维素酶活力却未见明显下降。Scrivener 等研究食木嶂螂 (panesthia cribrata)时发现纤维素酶活性只在前肠和中肠中存在，而在有大量原生动物存 在的后肠中却未检测到纤维素酶的活力。将这种嶂螂用含有四环素(能抑制细菌 和原生动物生长)的滤纸喂养 1-2 周后仍未检测到其肠道内纤维素酶活性的下降, 并且在此期间其产生的 CO2 和消耗的 O2 之比介于 0.98 和 1.03 之间，表明他们 并没有动用体内储备的营养物质。由此一系列实验证明，食木嶂螂很可能具有内 源性的纤维素降解能力。 1998 年,Smant 等用分子生物学的方法，从两种不同种属的植物寄生的线虫 中得到了 4 个内切 B-1,4 一葡聚糖酶(EG)的 cDN A；同年,Watanabe 等利用白蚁 (R.spertaus)的内切 B 一 1,4 一葡聚糖酶的抗血清对其 cDNA 文库进行免疫筛选