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高级光学显微镜原理 吴旭 2010-10-14 ? 显微镜发展历史 ? 显微镜的基本光学原理 ? 显微镜的重要光学技术参数 ? 显微镜的光学附件 ? 常用显微镜技术 ? 光学显微镜技术的发展 一 . 历史 ? 1590 据说荷兰 詹森父子制造出第一台原始的， 20×的显微镜； ? 1610 意大利 伽利略制造了复式显微镜； ? 1611 开普勒 阐明了显微镜的基本原理； ? 1665 英国物理学家罗伯特.胡克，140×； ? 不久，荷兰 安东尼.范.列文虎克，270×； ? 1684 荷兰 惠更斯目镜； ? 1870 德国物理学家，光学大师恩斯特.阿贝提出 了显微镜的完善理论； 胡克的显微镜和他看到的细胞 ? 1902 德国 艾夫斯 现代双目显微镜的基本 系统； ? 1941 Zeiss相差显微镜； ? 20世纪60年代中期 Nomarski微分干涉相差 显微镜； ? 近年来：共聚焦显微镜（LSCM），全反射 显微镜（TIRF）,受激发射损耗（STED ） 显微镜等。 实验中心现有的显微镜 正、倒置显微镜 细胞遗传工作站 用于: 对荧光标记的生物样 品（染色体）进行观 察和分析 激光共聚焦扫描显微镜 激光显微切割系统 活细胞影像系统 二 . 显微镜的基本光学原理 ? 折射和折射率 折射率n=c/v ? 透镜的性能 形状：双凸或双凹透镜 凹凸或凸凹透镜 平凸或平凹透镜 复杂程度： 单透镜、复透镜、透镜组 ? 影响成像的关键因素-相差 色差（Chromatic aberration） 球差(Spherical aberration) 慧差(Coma) 象散（Astigmatism） 场曲（Curvature of field） 畸变（Distortion） 采用设计合理的镜头、选择各片透镜的几何尺寸和折射率 ? 显微镜的成像（几何成像）原理 凸透镜的5种成象规律： （1） 当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在象方二倍焦距以内、焦点以 外形成缩小的倒立实象； （2） 当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在象方二倍焦距上形成同样大小 的倒立实象； （3） 当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在象方二倍焦距以 外形成放大的倒立实象； （4） 当物体位于透镜物方焦点上时，则象方不能成象； （5） 当物体位于透镜物方焦点以内时，则象方也无象的形成，而在透镜物方 的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚象。 物体处在物镜前F-2F（F为物方焦距）之间，则在物镜象方的二倍焦距 以外形成放大的倒立实象。在显微镜的设计上，将此象落在目镜的一倍焦距 F1之内，使物镜所放大的第一次象（中间象），又被目镜再一次放大，最终 在目镜的物方（中间象的同侧）、人眼的明视距离（250mm）处形成放大 的直立（相对中间象而言）虚象 ? 万能无限远（UIS)校正光学系统 ? 光线通过物镜后成为平行光束通过镜筒，并在结象 透镜处折射或完成无相差的中间象。 ? 物镜与观察筒内结象透镜之间可添加光学附件，而 不影响总放大倍数 ? 不需要安装附加校正透镜 三 . 显微镜的重要光学技术参数 ? 数值孔径 ? 分辨率 ? 放大倍数 ? 焦深 ? 视场直径（Field of view） ? 覆盖差 ? 工作距离 四 . 显微镜的光学附件 ? 物镜 ? 合轴、齐焦 ? 目镜 ? 聚光镜 ? 照明装置 ? 光轴 ? 物镜 1．消色差物镜（Achromatic objective）: 这是常见的物镜，外壳上常有Ach字样。这类物镜仅能校 正轴上点的位置色差（红，蓝二色）和球差（黄绿光）以及消除近轴点慧差。不能校正其它色光的色 差和球差，且场曲很大。 2．复消色差物镜（Apochromatic objective）: 复消色差物镜的结构复杂，透镜采用了特种玻璃或萤石 等材料制作而成，物镜的外壳上标有Apo 字样 ，这种物镜不仅能校正红绿蓝三色光的色差，同时能 校正红，蓝二色光的球差。由于对各种相差的校正极为完善，比响应倍率的消色差物镜有更大的数值 孔径，这样不仅分辨率高，象质量优而且也有更高的有效放大率。因此，复消色差物镜的性能很高， 适用于高级研究镜检和显微照相. 3．半复消色差物镜（ Semi apochromatic objedtive）: 半复消色差物镜又称氟石物镜，物镜，物镜的 外壳上标有FL字样，在结构上透镜的数目比消色差物镜多，比负消色差物镜少，成象质量上，远较 消色差物镜为好，接近于复消色差物镜。平场物镜是在物镜的透镜系统中增加一快半月形的厚透镜， 以达到校正场曲的缺陷。平场物镜的视场平坦，更适用于镜检和显微照象。 4．特种物镜：所谓特种物镜是在上述物镜的基础上，专门为达到某些特定的观察效果而设计制造 的。主要有以下几种： （1） 带校正环物镜（C