Optiprep分离人单个核细胞的操作流程.doc

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2020-06-13 发布于湖北
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Optiprep分离人单个核细胞的操作流程.doc

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人PBMCs最常用的分离方法是：把用生理盐水1：1稀释过的血液铺到密度为1.077的离心介质上，然后离心。介质主要为LymprepTM，NycoprepTM及OptiprepTM。 20世纪90年代，Ford和Rickwood用混合法分离了PBMCs，简化了如上操作流程。结合混合法利用OptiprepTM分离人PBMCs是目前最经济、最简便、分离效果最好的方法。所需溶液 OptiprepTM（用前轻轻摇匀） Tricine-buffered saline (TBS): 0.85% NaCl, 10 mM，Tricine-NaOH, pH 7.4。操作流程：： 1.把全血与OptiprepTM按8：1体积比混合，并轻轻混匀，混匀要彻底。注：如果20ml血液则需要2.5ml OptiprepTM。具体体积根据离心管的大小而定。 2.把0.5ml TBS铺到混合液的顶部，在20℃下1500g离心30min。注：TBS可以用任何其它的缓冲液替代。 3.从凹液面下大约1cm下的细胞沉淀中收集PBMCS。整个过程见如下图片。 4.用两倍体积的生理盐水稀释收集到的细胞。然后在250－500g下离心5－10min来沉淀细胞。相关图片：原始文献：参考文献 1. Ford, T. C. Rickwood, D. (1990) J. Immunol. Methods, 134, 237-241. 2. Kaden, J., Sch?nemann, C., Leverenz, S. Koch B. (1994) Allergologie Jahrgang, 17, 429-433. 3. Ford, T. C. Rickwood, D. (1992) Clin. Chim. Acta, 206, 249-252. Optiprep报价：250ml 1503.0元每分离20ml血液需要2.5ml，花费15.03元