卫生指标菌的检测.pptVIP

2020 年 1 月 7 日星期二 31 麦康凯琼脂平板 Age of culture is 24 h 呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润 2020 年 1 月 7 日星期二 32 四、 大肠菌群 检验方法及操作方法 国家标准 (2003 版 ) ： 三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试 验 ( 乳糖发酵试验 ) 行业标准： 两步法：推测试验→证实试验 国家标准 (2010 版 ) ： 两步法： LST 发酵→ BGLB 复发酵 2020 年 1 月 7 日星期二 33 GB 4789.3-2010 月桂基硫酸盐胰蛋白胨 （ Lauryl Sulfate Tryptose ， LST ）肉汤 煌绿乳糖胆盐（ Brilliant Green Lactose Bile ， BGLB ）肉汤 2020 年 1 月 7 日星期二 34 大肠菌群检验中常用的抑菌剂 ? 胆盐、洗衣粉、 SDS 、煌绿、结晶紫、孔雀绿 等。 ? 我国常用胆盐作为抑菌剂，猪、牛、羊 3 种胆 盐检验效果无差别。 ? 3 号胆盐、混合胆盐、去氧胆酸钠、兔胆盐会 影响大肠菌群的检验结果。 ? 用量、品牌、规格会影响结果。 2020 年 1 月 7 日星期二 35 MPN 法简介 The Most Probable Number Method 2020 年 1 月 7 日星期二 36 2020 年 1 月 7 日星期二 37 检样 稀释处理 EMB 等 革兰氏染色 乳糖发酵管 革兰氏阴性无芽胞 产气 革兰氏阳性 大肠杆菌阴性 大肠杆菌阴性 报告 不产气 乳糖胆盐发酵管 产气 不产气 大肠杆菌阴性 报告 报告 报告 大肠杆菌阳性 三步法简介 2020 年 1 月 7 日星期二 38 1:100 1:10 各加入 1ml 各加入 10ml 各加入 1ml 单料乳糖 胆盐发酵 管 单料乳糖 胆盐发酵 管 双料乳糖胆 盐发酵管 初 发 酵 检 样 稀 释 检样量 1g/ml 检样量 0.1g/ml 检样量 0.01g/ml EMB 分 离 培 养 证 实 试 验 乳糖发酵管 镜检 查 MPN 表报告结果 2020 年 1 月 7 日星期二 39 第三节 粪大肠菌群的检验 ? 粪大肠菌群 ：是大肠菌群的一种，又称为 耐热大肠菌群， 是指一群需氧及兼性厌氧， 在 44.5 ℃培养 24h 内能发酵乳糖产酸产气和 分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽 胞杆菌。 2020 年 1 月 7 日星期二 40 表 1 粪大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征 培养基 菌落特征 伊红兰培养基 (EMB) 紫黑色、有金属光泽，紫黑色、不带或略带光泽，淡 紫红色、中心紫黑色、黑红或深紫红色 品红亚硫酸纳 ( 远藤氏平板 ) 紫红色、有金属光泽，深红色、不带或略带金属光泽， 淡红色、中心较深 中国兰平板 深蓝色，浅蓝色、中心深蓝色 麦康凯平板 (Mac C) 桃红色，粉红色、中心桃红色 2020 年 1 月 7 日星期二 41 粪大肠菌群检验程序 2020 年 1 月 7 日星期二 42 2020 年 1 月 7 日星期二 43 1 、从制备样品匀液至稀释完毕 , 全过程不得超过 15min 。 2 、对产酸但未看到气泡的乳糖发酵，用手轻打动试管， 如有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，应作 进一步试验。 3 、不可用其他胆盐代替指定的胆盐。 六、检验注意事项 2020 年 1 月 7 日星期二 44 第四节 食品中大肠杆菌计数 ? 大肠杆菌（ Escherichia coli ），学名大肠埃希 氏菌，被归为肠杆菌科，属于埃希氏菌属，革 兰氏阴性短杆菌，能在 44.5 ℃发酵乳糖、产酸、 产气， IMViC 生化试验为 ++-- ，或为 -+-- 。 2020 年 1 月 7 日星期二 45 大肠杆菌检验的卫生学意义 ? 多数为肠道正常菌群，并产生有益的作用； ? 直到 20 世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的 大肠杆菌对人和动物有致病性，它们能引起食 物中毒，统称为致病性大肠杆菌； ? 大肠杆菌学用作受粪便污染的重要指标； ? 存活时间与一些常见的肠道病原菌接近，它们 的出现可能预示首某些肠道疾病的病原菌存在，