布病试管凝集试验.docVIP

布病试管凝集试验 实验前准备 试管的准备 把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟，浸泡后用试管刷将其刷干净。先用自来水冲洗10遍，再用去离子水冲洗1遍。 试管冲洗干净后倒置于篮子中，等水沥干后置干燥箱中，160℃干燥3个小时（整个干燥过程需要5~6个小时）。 实验前要配置0.5%的石炭酸生理盐水 配置方法：称取0.5克石炭酸，加入100ml的生理盐水中，配置后置高压锅中121℃高压30分钟。 2、试剂的准备 ①标准抗原:按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液作1，20(工作浓度)稀释。 ②标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 ③标准阴性血清:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 3、被检血清 ①按常规方法采血分离血清 血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。 ②运送和保存血清样品 防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。 二、试验操作过程 1、确定被检血清的稀释度 牛 、马 、 骆驼稀释用1:50,1：100,1：200,1：400(4个稀释度);猪、山羊、绵羊和狗用1：25,1:50,1:100,1:200(4个稀释度)。大规模检疫时也可用2个稀释度，即牛、马、骆驼用1：50,1：100，猪、山羊、绵羊和狗用1:25,1:50,为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。 2、稀释被检血清--猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释 ①每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第I管加1.15 mL稀释液，第2-4管各加人0.5 m L稀释液。 ②取被检血清0.1 mL，加人第1管，充分混匀后吸弃0.25 mL。 ③从第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5 m L至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去0.5 mL，稀释完毕。 ④从第1至第4管的血清稀释度分别为1：12.5,1：25,1：50,1：100。 3、加抗原 将 0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1 : 25,1 : 50,1 : 100,1：200，牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1：50,1：100,1：200,1:400。各反应管反应总量为1 mL。 4、设立对照--每次试验都应设立下列对照。 ①阴性血清对照 阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同 ②阳性血清对照 阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度，加抗原的方法与被检血清同。 ③抗原对照 在0. 5mL稀释液中，加0.5 m L抗原(1：20) 5、比浊管的配置 每 次 试 验均须配制比浊管，作为判定凝集反应程度的依据，先将抗原(1: 2 0)用等量稀释液作一倍稀释，然后按表1配制比浊管。 表 1 比 浊 管 的 配 制 6、感作 所有试验管充分震荡后，置37℃温箱感作20小时 7、结果判断 确定每份被检血清效价：比照比浊管判读，出现++以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。 ①结果判定 当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(一)，阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度，则证明试验成立，可以判定。否则，试验应重做。 ②牛、马和骆驼于1:10。血清稀释度，猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释度出现“++”以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。 三、试验后的处理 1、试管的处理 把所用试管必须高压处理（121℃高压30分钟），然后用自来水彻底洗涮干净，再用去离子水冲洗，后放置框中沥干，干燥（160℃干燥3个小时 配置好而未用完的抗原及其盛装其瓶子的处理 瓶子连其抗原一同高压灭菌（121℃高压30分钟 试管架的处理 把试管架上带有样品标记的符号用无水乙醇彻底清除掉，后用自来水把试管架冲洗干净，晾干、保存备用