质谱技术参考方法不确定度评定.pdf

徐蓓 xubei@nim.ac.cn 中国计量科学研究院 2018年10月15日 上海 一 质谱技术相关参考方法研发注意事项 二 同位素稀释质谱法测量不确定度评定模型 三 不确定度评定实例 四 测量结果不确定度的表达 一、有机质谱相关参考方法研发注意事项 1. 参考方法的定义 • 在校准或参考物质定值时，为提供测量结果所采用的测量程序，它适合用于 评价由同类量的其它测量程序获得的测得的量值的测量正确度。 隐含的内容：各种影响测量的因素都进行了仔细研究 2. 同位素稀释-质谱测量技术 2.1 基本流程 解 水 、 离 解 、 取 提 、 白 蛋 除 衡 平 匀 混 ， 标 内 入 加 色谱质谱测量 净化、浓缩 色谱质谱测量 净化、衍生 色谱质谱测量 3 一、有机质谱相关参考方法研发注意事项 2.2同位素标记内标的选择  以质量数相差3或以上为好。主要是避免天然同位素的影响 如：胆固醇， 碳-13标记为好，避免氘标记（胆固醇）。氘标记内标与被测 物容易产生色谱分离，有些时候可能会发生结构变化导致检 测离子强度变化（孕酮）。 2.3内标平衡时间 要保证足够时间。通常30分钟—2小时。 2.4水解和提取 测量物在血液中的存在形式主要有游离、弱结合、强结合 游离：尿素、尿酸、肌酐、葡萄糖 弱结合（范德华力、氢键）：雌二醇、雌三醇、孕酮 强结合（共价键）：胆固醇、甘油三酯（被测物为总甘油时） 解离和水解完全非常重要 4 一、有机质谱相关参考方法研发注意事项 2.5净化和衍生 衍生试剂（衍生物），硅烷化；28Si 、30Si天然同位素的影响,手性分 离的问题（葡萄糖） 2.6 色谱分离和质谱测量 离子的抑制效应；校准物（溶液）的稳定性：葡萄糖、肌酐 2.7 干扰成分 葡萄糖-半乳糖；胆固醇- ；甘油三酯-卵磷脂；激素类-类固醇 2.8. 同位素稀释-质谱测量定量 单点（精确匹配法）、两点（括号法）、多点（线性曲线法） 5 一、有机质谱相关参考方法研发注意事项 2.9 定量方法选择 以胆固醇GC/MS测量为例，内标物为13C2 –胆固醇，硅烷化衍生；质 谱测量时发现胆固醇中含5%标记胆固醇；标记胆固醇中含5%胆固醇。 如果配置4个校准点：0.8:1, 0.9:1, 1.0:1, 1.1:1, 1.2:1, 实际得到 的结果是：0.818:1, 0.909:1, 1.0:1, 1.1:1, 1.2:1 • 结果说明，测量物与标记物的比值为1：1时，结果最准确； 如果测量离子之间有较大干扰时，以精确匹配方法较好。 6 二、同位素稀释质谱法测量结果不确定度评定 1. 不确定度评定“自下而上”的方法 1.1不确定度传播率 n ∂f