修改第七章细胞培养及次生代谢物生产课件 文档资料.ppt

实现悬浮培养 细胞同步化 的方法可分为 物理方法 和 化学方法 两种。物理方法主要是通过对细胞物理特性（细胞或小细胞团 的大小）或生长环境条件（光照、温度等）的控制以实现高度 同步化，物理方法包括体积选择法和低温休克法。 化学方法是使细胞遭受某种营养饥饿，或是通过加人某种生长 抑制剂阻断细胞分裂周期而停留于某一分裂相，从而达到细胞同 步化的方法。 （ 1 ） 饥饿法 饥饿法的原理是除去细胞进行细胞分裂和生长所必需的营 养成分或激素，使细胞停滞在细胞的分裂间期（ G 1 期或 G 0 期），经 过一段时间的饥饿之后，重新补给除去的必须生长物质，诱导恢 复静止细胞的同步分裂和生长。 （ 2 ）抑制法 通过使用 DNA 合成抑制剂如 5 一氨基尿嘧啶、氟脱氧尿核 苷（ FUdR ）、羟基脲和胸腺嘧啶脱氧核苷等使培养细胞同步化。 细胞受到这些抑制剂处理后，细胞周期被阻断在 G 1 期，细胞都 滞留在 G 1 期和 S 期。去掉抑制剂后，细胞即进人同步分裂和生 长。 5. 影响细胞悬浮的因素 （ 1 ） 培养材料 1 、用于诱导愈伤组织的外植体类型和基因型以及用于悬浮培 养的初始愈伤组织材料均对细胞悬浮体系的建立均有较大影响。 2 、外植体的类型及生理状况对愈伤组织的诱导十分关键。植 物常用的外植体幼幼胚、成熟胚、下胚轴、子叶、叶片、幼穗 和花药等。 （ 2 ）培养基的影响 植物细胞悬浮培养过程中，基本培养基组成、溶氧以及添 加物等对细胞分裂和生长具有十分重要的作用。不同种类植物 对营养物质的需求是不同的，悬浮细胞培养时，对基本培养基 的要求也有差异。培养基中的碳源、氮源、一些微量元素以及 一些有机物质不仅影响细胞正常分裂和生长以，而且很多影响 到细胞次生代谢产物的形成。 1 、细胞悬浮培养所用基本培养基中大量元素的浓度对悬浮培 养细胞存活率有较大影响。 2 、低浓度的总氮有利于细胞的分裂，而高浓度的总氮则有利 于细胞的生长。铵离子被用于合成谷酰胺，硝态氮诱导代谢途 径中的多种酶基因的表达。 3 、蔗糖是植物组织细胞培养中最常用的碳源和能源，研究表 明，一定浓度的蔗糖不仅能够促进植物细胞的生长，还能够刺 激次生物质的合成。 4 、溶氧有一定的极限，过高或过低都会影响到细胞生长和产 物合成，特别是在高密度培养时，供氧不足往往可能是限制产 量的主要因素之一。 5 、植物生长调节物质对悬浮细胞生长有较大的影响，在细胞 悬浮培养时，不同种类的激素对细胞的分裂和生长的作用不同。 如生长素类， 2 ， 4-D 有助于薄壁细胞的生长，因此，悬浮培养 中，常适量加入 2 ， 4-D 。 （ 3 ）培养条件的影响 植物细胞培养过程中，培养条件对细胞的生长以及目标次 生代谢产物的合成具有很大的影响。温度、光照、电磁场及电 磁辐射以及超声波等对于植物细胞培养都有很大的影响。在一 定的温度条件下，培养的植物细胞才能正常生长、增殖和维持 正常的新陈代谢，植物细胞生长的最适温度一般为25℃，不同 的植物种类略有差异。 第三节 植物细胞的规模培养 利用植物细胞大规模培养技术为植物有用代谢产物的生 产提供了有效途径和生产方法。主要集中在制药工业中一些价 格高、产量低、需求量大的化合物上如紫杉醇、长春碱、青蒿 素等 。植物大规模细胞培养技术已在农业、医药、食品、化 妆品、香料等领域广泛用于生产有价值的产品。人类迄今通过 植物细胞培养获得的生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿 瘤药物不下 50 多个大类。 一、植物细胞大规模培养方法 植物细胞规模培养是大规模生产次生化合物的最有效的方 法，其目的在于利用生物反应器为次生代谢产物的生产获得大 量遗传稳定、同步分裂、增殖迅速并且能大量积累次生代谢产 物的细胞，生物反应器是大规模细胞培养所用的为细胞生长和 代谢提供适宜场所和环境的装置。 1 ．植物细胞大规模悬浮培养 大规模悬浮细胞培养的原理与细胞悬浮培养基本一致。 用于大规模细胞培养的生物反应器有机械搅拌式反应器和非 搅拌式反应器（又称气动式反应器）两大类。根据所用生物 反应器的不同，将植物细胞大规模悬浮培养分为机械搅拌式 植物细胞规模培养和气动式植物细胞规模培养。 （ 1 ） 机械搅拌式植物细胞规模培养 机械搅拌式植物细胞规模培养是利用搅拌式反应器大规 模培养植物细胞的悬浮培养技术。搅拌式生物反应器常常用 于微生物发酵，该反应器用于植物细胞规模培养时可借鉴微 生物培养的成功经验对植物细胞培养过程进行控制。 机械搅拌式生物反应器只能用于对剪 切力