第九章配子与胚胎生物工程技术 课件.pptVIP

? 孕酮能够抑制腺垂体释放 FSH ，每日肌注或口服 孕酮，或经 阴道海绵栓给予孕酮或其类似物 ，一 般处理 12-18 天后，可以抑制卵泡发育。停止处理 或撤除海绵栓后，孕酮的抑制作用消失，卵巢上 即有卵泡发育，通常在 2-3 天内发情。 ? 为了提高排卵的效率，在孕激素处理结束的前一 天，可以给予小剂量的 FSH 。 ? 此法费用低，但处理时间长。 3.2.2 孕激素处理法 4.1 冲胚液和保存液的制作 ? 冲胚液有很多种，目前最常用的为含 5% 犊牛血 清的杜氏磷酸盐缓冲液（ D-PBS ），也可用于体 外短期保存胚胎。 ? 保存时间长或体外培养多用 M-199 液。 4. 胚胎的收集 4.2 回收过程 ? 牛 适宜于 5-7 日龄 胚胎 ; ? 现均采用 二通管非手术采卵法： 用直肠把握子宫 颈法插入带有探针的二通管直至一侧子宫角的基 部，通过打气孔注入 8--10ml 空气 , 抽出探针， 通过中心管道反复注入 -- 回收冲卵液 , 连续 5--6 次。同样方法冲另一侧子宫角。 ? 子宫角回收的液体较多，可以通过专用胚胎漏 斗除去多余的冲卵液，在连续变倍解剖显微镜 （实体显微镜）下进行 检胚 ； ? 胚胎的质量评定：主要采用形态学方法，优质 胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植。 5. 胚胎的检查和评定 ? A 级 ; 形态完整 , 轮廓清晰 , 呈球形 , 分裂球大小均 匀 , 透明带适中； ? B 级 ; 轮廓清晰 , 色调和细胞密度良好； ? C 级 ; 轮廓不清楚 , 色调发暗 , 结构较松散 , 游离的 细胞和液胞较多； ? D 级 ; 轮廓模糊 , 色调暗 , 结构松散 , 碎片细胞和液 泡很多。 5.1 胚胎的分级标准 5.2 不同发育阶段的正常胚胎 5.3 未受精卵或异常胚胎 2-cell 4-cell 8-cell 16-cell Morula Blastocyst 5.4 正常胚胎的形态 6. 胚胎的移植 ? 重点应检查 子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张 性，然后检查卵巢上黄体的发育情况（位置、大小 ），只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛 ，并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧。 ? 牛站立保定于六柱栏保定架内，用 2% 盐酸利多卡因 或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉，用 18 号针头， 每只牛约 5ml 。 6.1 受体母牛的准备 1.1ml 注射器 2. 装管接头 3. 细管 A. 棉塞 B. 气泡 Ⅰ、Ⅲ、保护液 Ⅱ.含胚段 装管器械和装管方法 6.2 胚胎的移植方法 直肠把握法 第九章 配子与胚胎生物工程技术 刘 宏 ? 配子与胚胎生物工程概述 ? 胚胎移植技术 ? 其他胚胎工程技术概述 ? 配子与胚胎生物工程 也称 胚胎生物技术或胚 胎工程技术 ，主要是对动物的 卵子、精子和 胚胎 在体外条件下进行各种操作，以 加速繁 育经济动物 ， 培育优良品种 ，或 挽救濒危动 物 使用的一系列工程技术方法。 第一节 配子与胚胎生物工程概述 研究内容 ? 胚胎移植 ? 胚胎冷冻保存 ? 体外受精 ? 动物克隆 ? 转基因技术 ? 性别控制 ? 胚胎干细胞技术 ? 胚胎嵌合技术 胚胎移植 一、胚胎移植技术概述 二、胚胎移植的意义 三、国内外发展概况 四、胚胎移植的基本原则 五、牛胚胎移植操作步骤 一、胚胎移植技术概述 1. 定义 ? 胚胎移植是指将一头 良种母畜配种后的早期胚 胎取出（或通过体外受精及其他方式得到体外 生产的胚胎）， 移植到另一头 同种且生理状态 相同 的母畜体内，使之继续发育成为新个体的 过程。 ? 实际上是由 产生良种胚胎的供体 和 养育胚胎的 受体 分工合作共同繁殖后代的技术。 牛 胚 胎 移 植 技 术 路 线 示 意 图 ? 着床前早期胚胎的游离状态； ? 不同个体（物种）早期胚胎发 育内环境相似； ? 不会发生免疫排斥 2. 理论基础 二、 胚胎移植的意义 ? 充分发挥优良母畜的繁殖潜力，扩大 良种畜群 ? 加速育种进程 ? 简化良种引进方法 ? 保存品种资源 ? 诱发单胎动物产双胎 ? 研究手段 三、国内外发展概况 胚胎移植技术是 20 世纪畜牧业中继人工授 精技术之后又一次巨大变革，业已成为一项 充分发挥优良母畜繁殖潜力的实用繁殖新技 术。 ? 1951 年，美国诞生第一头