ca1500凝血仪原理及操作注意事项PPT参考课件.pptVIP

1 2 3 仪器测试原理 为凝固法、发色底物法和免疫分析法 4 凝固法 　基本测试原理是光学法的散射光检测（用660nm光电二极管检测散射光强度的变化），还并用了百分比方式的测定原理：当试剂加入标本后，凝血开始启动，随之光学出现变化，仪器把这种光学的变化描绘成凝固曲线：把开始出现凝集的起始点作为0%、把完全凝固的终点作为100%、把50%变化点处作为凝固时间（报告点），当测定含有干扰物（黄疸、溶血、高脂血症等）或低纤维蛋白原血症的特殊标本时，其作为起始点的0%的基线会随之上移或下移,相当于扣除本底干扰. 5 凝固法测试项目 以上凝固法检测原理所测定的项目包括了最常用的如PT、APTT、FIB、TT、内源凝血因子（F VIII、XI、XI、XII），外源凝血因子（F II、V、VII、X）等 6 发色底物法：血浆、试剂、底物混合发生反应，根据吸光度变化，计算结果 是通过测定产色物质的吸光度变化，以推算待测物的含量，这种方法属生物化学法，其基本原理是：试剂中为人工合成的含某种酶裂解位点的短肽，与产色物质如对硝基苯胺(pNA)连接，待检物品中含有活性酶或无活性的酶原被加入的激活剂活化，在检测过程中产色物质被解离下来，使被检物品出现颜色变化，其与被检物含量呈一定的数量关系。此方法以酶学方法为基础，可检测项目包括如：AT-III、Plg、PC、PS、FM、PAI，Tpa，α2-AP等。 7 免疫分析法：血浆与乳胶试剂发生反应 以被检物作为抗原，制备相应的多克隆抗体，利用抗原抗体的特异结合反应来对被检物进行定性和定量检测，在凝血仪上多采用免疫比浊法测定，其基本原理是当一定波长的光线通过反应混合液时，被其中抗原抗体反应形成的免疫复合物吸收而减弱，在一定范围内，其吸光度与复合物量呈正相关，因此当抗体量固定时，根据复合物的吸光度值，即可推算出待测抗原含量，可测定项目如D-二聚体、vWF因子、FDP等 8 凝血测试一般注意事项 9 1.样本采集 穿刺要一针见血，避免淤血，气泡，溶血和组织液污染； 为避免血液当中有组织液的渗入，采血时以第二或第三管样品做凝血测试管为佳； 如果从导管取样，则需用生理盐水冲洗管道，前面5ml血不能使用； 采血后立即与抗凝剂充分混合，尽快送往实验室； 采血量必须准确，如果少于计划量的90%，则不能使用； 不能在静脉穿刺部位或附近部位采样； 10 2.样本处理 使用3.8%或3.2%(W/V)拘橼酸钠溶液作为抗凝剂； 血样与抗凝剂的比例为9:1，如果血球压积20%或55%，则需调整这个比例，方法是：0.00185×血液毫升数×(100-压积)=抗凝剂毫升数，按比例重抽血检验； 11 2.样本处理 血浆分离：采样后60分钟内进行；分离血浆应在3000r/min 离心10分钟，务使血小板去除； 盛血浆容器应加塞，防止PH改变； 血浆存放时间不能太久：室温存放在2个小时以内，2-8摄氏度，不能大于4个 12 3.试剂 清洗液（clean）开盖后放于仪器上有效期仅24小时 缓冲液：开盖后放置仪器上保存:＜24h,使用放置时间太长的缓冲液会导致凝血时间延长即Fib含量测定偏低! 质控血浆：1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用 13 3.试剂 TT:每瓶用5ml专用缓冲液溶解,须放置室温10分钟后才使用；机上有效期（15℃）：10小时 PT：每瓶用4ml蒸馏水溶解,须放置室温或37℃30分钟后才使用；机上放置时间长，有沉淀，可稍加混匀。 溶解时要轻转动容器，避免剧烈振荡 14 4.影响测定结果的因素 抗凝剂：草酸钠、EDTA、肝素不适于作抗凝剂； 严重黄疸，脂血，重度溶血会影响测定结果，如是因抽血不当或采血时机不当引起的，应尽可能重抽血。 使用纤溶药物，如双香豆素，链激酶，尿酶等可使凝固时间延长； 超过治疗剂量的肝素使凝固时间延长； 15 FDP增加使凝固时间延长； 某些药物，如口服避孕药，雌激素，天门冬酰胺酶，钠络酮等影响测试结果； 样本采集和处理不当，都会使凝固时间缩短或延长，特别是抗凝比例不当的样本应退回重抽　　10% 妊娠和急性炎症会影响某些测试结果； 16