第二章实验室设置及一般专业技术2学时.doc免费

植物细胞工程实验室设置及一般技术 一．实验室设置 细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。个人收集整理 勿做商业用途 1．基本实验室 （1）准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。 （2）接种室：接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外，应行密闭。个人收集整理 勿做商业用途 （3）培养室培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，有的还需要有可调节的空气湿度。培养室应保持干燥和清洁。个人收集整理 勿做商业用途 准备室,宽敞明亮,通风效果好. 无菌室,封性好,干燥清洁,保持无菌,应防空气对流 培养室,控温,控光,空气干燥清洁 2．辅助实验室 （1）细胞学实验室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。个人收集整理 勿做商业用途 （2）摄影室及暗室：其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。 （3）生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。个人收集整理 勿做商业用途 细胞工程实验室布局的其基本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。 二．实验室所需的设备、用具 1．基本设备：冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。 2．灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。 3．无菌操作设备：净化工作台、接种箱。 4．光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。 5．细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。 6．细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生化分析设备等。 7. 培养器皿及实验用具 玻璃器皿： 新型材料器皿：玻璃漏斗、量筒、试管、锥形瓶、吸管、烧杯、试剂瓶等 金属材质用具：剪刀、镊子（弯头、平头）、眼科剪、眼科镊、滤器等。 三. 常用技术 （一）洗涤技术 植物组织培养最重要的，也是最基本的要求，就是各项操作都应从无毒害、无污染的培养环境来考虑。培养过程中最经常、最大量的工作之一，是洗涤培养瓶及其它常用器皿。在清洗器皿处应有较大的水池，水池应用水泥制作，白瓷砖砌内外表面，池底另放一张橡胶垫，以减少器皿破损。自来水龙头宜采用三孔鹅颈式的，用水方便，并在需要时可加装抽滤器。下水道应畅通，以免妨碍工作。除水池外，还需辅助以若干盆与桶。个人收集整理 勿做商业用途 洗瓶时先将瓶子在清水中泡一会儿，然后在水龙头下涮去瓶内污物，沥干水，泡入浓洗衣粉水中，再用瓶刷沿瓶壁上下刷动和呈圆周旋转两个方向刷洗。瓶外也要刷到，不要留下未刷到之处。刷后放到水龙头下用流水冲刷4次，以彻底冲去洗衣粉残留物。洗好的瓶子应透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠，即表示无污迹存在。通常无须乎再用蒸馏水涮一遍，直接放入洁净的大果菜篮中，再置搁架上沥晾水汽，这可能是最省事、最节约又少占空间的办法。也可制作晾洗架，瓶子倒放在孔格中或挂在小木棍上，这样洗后要摆一遍瓶子，用时再收一次瓶子。急等使用的瓶子可以用烘箱烘干。烘时缓慢升温，温度也无须太高。 个人收集整理 勿做商业用途 1．洗涤液 铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成，可根据需要配制成弱、中、强三种。个人收集整理 勿做商业用途 弱：用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。 中：用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸 875ml。 强：与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到饱和为止。 一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。 2．洗涤方法 2.1 新玻璃器皿洗涤：先用自来水刷洗，再用5％稀盐酸浸泡，以中和玻璃表面的碱性物质赫其他有害物质。 2.2 使用过的玻璃器皿的清洗 使用过的玻璃器皿应立即浸入清水，避免干涸难洗。 洗涤剂洗净后，浸酸性洗液过夜。 从酸性洗液捞出后自来水洗净，蒸馏水刷洗3次，凉干后高压灭菌。 2.3 塑料用品洗涤 塑料用品一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。 2.4 橡胶用品的清洗：浸泡，2%NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，1%HCl浸泡30min，流水冲洗，蒸馏水煮沸20min，三蒸水冲洗2~3次，晾干或烘干。个人收集整理 勿做商业用途 2.5 金属用品洗涤 金属用品一般不宜用各种洗涤液