免疫学--放射免疫技术.pptVIP

一、放射免疫分析－基本原理 竞争性结合反应：标记抗原（Ag*）和非标记抗原（Ag）与限量抗体(Ab)竞争性结合 Ag*和Ag具有等同的与Ab结合能力 技术要点 抗原抗体反应： 1）平衡法：标记与非标记Ag同时与Ab反应 2）顺序饱和法：待测Ag先与Ab反应，后加入Ag* B和F的分离 放射性强度测定 数据处理 第三节 免疫放射分析 Miles将放射性核素标记胰岛素抗体，用双抗体夹心检测血清胰岛素，为区别放射免疫分析法，将之称为免疫放射分析。 徐文锦 临床免疫学 检验教研室 * * 第八章 放射免疫技术 1986年前苏联切尔诺贝利核灾难 可怕吗？ Yalow和Berson利用放射性核素标记胰岛素，建立了放射免疫分析技术。 于1977年获得诺贝尔生理医学奖 掌握: 1.掌握标记免疫技术的概念； 2.放射免疫分析及免疫放射分析的原理。 熟悉: 1. RIA与IRMA的异同点及技术要点。 2.放射免疫技术的特点及应用。 第一节　概述 一、常用的放射性核素 二、标记物制备及鉴定 三、免疫复合物的分离 第二节　放射免疫分析 一、基本原理 二、实验方法及测定 第三节 免疫放射分析 一、基本原理 二、IRMA与RIA的比较 主要内容 第一节 概述 放射免疫技术（radioimmunoassay technique)： 是以放射核素为示踪物的一种免疫标记测定技术。 优点：灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等 缺点：放射性元素污染 早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析(RIA)； 稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)。 放射免疫 RIA 以标记抗原与反 应系统中未标记 抗原竞争结合特 异性抗体来测定 待检样品中抗原 量。 免疫放射 IRMA 以过量标记抗体 与抗原非竞争结 合，采用固相免 疫吸附载体分离 游离和结合标记 抗体。 放射受体分析 RRA 放射配体结合 分析RBA 其它 一、放射免疫技术－原理及分类 二、常用的放射性核素 125I 3H 射线 γ β 理化性 活泼 差 核素丰度 90% － 半衰期 60.2d 12.3y 标记方法 简单 复杂 标记设备 低廉 昂贵 测量条件 简单 复杂 常用标记核素 125碘-标记物的制备－标记 125I- I-氧化成碘原子或I+， 通过取代反应置换被标 记物分子中酪氨酸或酪 胺残基以及组胺残基上 的氢原子。 125I或125I+ 125I-标记物 （混合物） 取代反应 直接标记法 三、标记物制备及鉴定 间接标记法 先将125I 标记在含酪氨酸残基上，与蛋白分子上的氨基酸残基反应，从而使待标记物被碘化。 125碘-标记物的制备－纯化 凝胶过滤法 离子交换层 析法 聚丙烯酰胺 凝胶电泳 高效液相色 谱法 聚合、损伤物 标记蛋白 游离125I 125碘-标记物的制备－鉴定 标记物质量 放射化学纯度 比放射性 免疫活性 放射化学纯度 单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率 应大于95% 比放射 单位化学量标记物中所含的放射性强度 单位：Ci/g mCi/mg Ci/mmol 比放射性过高，将影响标记物免疫活性 免疫活性 亲和性 特异性 效价 免疫复合物与游离抗原的分离 分离方法要求： 简便 效果要好、快速 试剂稳定、价廉 不易受干扰 适合自动化 常用分离方法： 吸附去附游离抗原法：加吸附剂 化学沉淀法：选择沉淀分离复合物 双抗体法：加抗抗体 PR试剂法：双抗体法+化学沉淀法 固相分离法：磁颗粒法为常用  第二节 放射免疫分析 徐文锦 临床免疫学 检验教研室 * *