动物细胞工程课件[文字可编辑].ppt

2.2 动物细胞工程 细胞工程的基本技术 植物细胞工程 动物细胞工程 植物组织培养技术 植物体细胞杂交技术 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体技术 动物细胞培养技术 ( 基础 ) 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成 单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细 胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 1 、动物细胞培养的概念 动 物 细 胞 培 养 技 术 动 物 细 胞 培 养 技 术 思 考 1 、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组 织或器官，请解释原因？ 2 、为什么动物细胞培养过程需将组织分散成单个细胞？ 3 、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 4 、如何理解原代培养和传代培养？ 5 、传代培养的细胞能一直传代下去吗？为什么？ 6 、动物细胞培养需满足哪些条件？ 7 、动物细胞培养有哪些应用？ 动物细胞培养过程 1 、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分 化程度低，容易培养。 2. 将组织细胞分散成单个细胞 ? 将组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶 处理一段时间，这样组织就会分三成单个细 胞。 思考：为什么培养前要将组织细胞分散成单 个细胞？ ①单个细胞容易和周围环境进行物质交换 —— 获 得营养物质、氧气等，排出代谢废物； ②分散成单个细胞培养能使细胞水平操作的其他 技术得以实现 。 1. 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分 散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？ 用胃蛋白酶行吗？ P44 旁栏 用胰蛋白酶分散细胞 ， 说明细胞间的物质主要 是蛋白质。 不能用胃蛋白代替 因为两者的最适 pH 不同，动物细胞培养适宜的 pH 为 7.2 — 7.4 ，此环境下胃蛋白酶（最适 pH 2.0 ）没有活性，而胰蛋白酶 ( 最适 pH 7.2-8.4) 的活性较高。 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ P44 寻根问底 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间 的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用， 因此 必须控制好胰蛋白酶的消化时间 。 动 物 组 织 单 个 细 胞 细 胞 悬 液 贴 壁 生 长 分 瓶 培 养 10 代 细 胞 50 代 细 胞 不 死 细 胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数癌变 少数 3. 配制细胞悬液，进行原代培养及传代培养 ? 1 、细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、 易于贴附。 2 、细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞 的接触抑制 。 细胞 悬浮 液 10 代 细胞 50 代 细胞 无限传 代 原代培养 传代培养 4. 如何界定原代培养和传代培养？ 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 ⑴原代培养 : 将动物组织消化后的初次培养。 ⑵传代培养 : 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶 继续培养。 传代培养 动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 （分解弹性纤维） 10 代细胞 原代培养 50 代细胞 细胞株 无限传代 细胞系 动物细胞培养过程 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1. 体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2. 体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ P46 讨 论 充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量 元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。） 适宜温度、 PH 和气体环境；无菌无毒环境 4 、动物细胞培养的条件 （抗生素，更换培养液） ①无菌、无毒 ②营养：与体内基本相同 ③温度和 PH ④气体环境 （ 95% 空气 + 5% CO 2 ） （ 36.5 ±0.5℃， 7.2-7.4 ） （合成培养基） ? 1 、大规模的生产生物制品。 ? 2 、培养的动物细胞作为基因工程的受体 细胞。 ? 3 、检测判断物质的毒性。