万寿菊花萃取物中叶黄素的分离与纯化.pdfVIP

DOC格式论文，方便您的复制修改删减 万寿菊花萃取物中叶黄素的分离与纯化 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：李高峰 聂永亮 王佩维 【摘要】目的从万寿菊花萃取物的皂化产物中分离、纯化制备高纯 度叶黄素。方法万寿菊干花颗粒经超临界CO2萃取得到万寿菊花萃 取物，加碱皂化的产物用水稀释后，用二氯甲烷从中萃取叶黄素，在 分出的水相中加入氯化钙，分离出被分散在水相的叶黄素，蒸馏溶剂 后用醋酸乙酯与石油醚的混合溶剂洗涤，再用无水乙醇洗涤，制得高 纯度叶黄素。结果实验确定了加水量为皂化产物的4倍；二氯甲烷用 量为水与皂化产物的和；醋酸乙酯与石油醚的体积比为1∶4 ，用量为 分离产物的3倍。结论此法制得的叶黄素纯度高，色泽纯正，工艺简 单。 【关键词】万寿菊；叶黄素；分离；纯化 叶黄素是天然抗氧化剂，具有良好的抵御游离基在人体内造成 的细胞与器官损伤的能力［1］,可用于防治由于机体衰老引发的冠心 病、心血管硬化［2 ］和肿瘤等疾病。另外，叶黄素是眼中含有的仅 有的两种类胡萝卜素之一，预防和治疗老年性眼球视网膜黄斑区病变 DOC格式论文，方便您的复制修改删减 ［3 ］、白内障等眼部疾病是叶黄素的独特功能。不仅如此，叶黄素着 色能力强，又富有营养，是优良的食品着色剂和动物饲料添加剂［4 ］, 因此，叶黄素被广泛应用于医药、保健品、化妆品、食品、动物饲料、 水产、烟草等行业［1］。万寿菊中的反式叶黄素酯的含量很高，而 他类胡萝卜素的含量较少，是非常好的叶黄素来源。本研究从叶黄素 浸膏皂化产物中萃取分离、纯化制备高纯度叶黄素的工艺条件，以期 为规模制备高纯度叶黄素提供参考。 1 材料与仪器 万寿菊干花颗粒由大同市天然色素有限公司提供；叶黄素 标准样品，由万寿菊干花经超临界CO2萃取制备出浸膏，经皂化、 分离和纯化处理制得,经天然产物标准样品国家核心实验室（北京） 分析鉴定含量为97.29%。 HA121-50-01-C超临界萃取装置（采用一萃二分流程）由 江苏南通华安超临界萃取有限公司制造；LC5500型高效液相色谱仪 由北京东西电子技术研究所制造； ME211 型超声波清洗器，美国 Metter Electronics 公司生产; Millipore 膜过滤器及真空泵 , 美国 Waters 公司生产； DF-20 型流水式中药粉碎机，由无锡中银机械 制造有限公司制造。CO2 ，由太原天计应用化工有限公司生产，食品 级，纯度在99%以上；万寿菊萃取物由万寿菊干花颗粒经超临界CO2 萃取制得；皂化、分离与纯化所用试剂均为分析纯，由天津精细化工 DOC格式论文，方便您的复制修改删减 开发中心生产；HPLC 分析用试剂为分析纯，由北京化工厂生产；水 为二次蒸馏水。 2 方法 2.1 万寿菊萃取物的制备及皂化 万寿菊干花颗粒经超临界CO2 萃取，得到的萃取物在KOH 的 醇溶液中皂化反应后，将溶剂蒸馏得到皂化产物。 2.2 游离叶黄素的分离 将皂化产物加水稀释后，用二氯甲烷萃取，分出水层，水洗二 氯甲烷层至水相无色透明，且为中性。收集萃取与水洗过程中分出的 水相，在其中加入足量氯化钙，至水相无色透明，过滤沉淀，用二氯 甲烷洗涤沉淀，收集洗液，并用水洗至水相无色透明且为中性。将洗 液与萃取所得的二氯甲烷相合并，蒸馏溶剂得到叶黄素粗品。 2.3 游离叶黄素的纯化 叶黄素粗品中加入醋酸乙酯与石油醚的混合溶剂洗涤，过滤除 去杂质，得到叶黄素结晶体；再用无水乙醇洗涤，得到叶黄素的重结 晶体。 2.4 叶黄素的高效液相色谱分析 称取叶黄素样品20.0 mg ，用流动相配成8×10-6 g·ml -1 的溶 液。色谱条件: 色谱柱为Diamonsil C18 柱; 甲醇 ∶乙腈∶醋酸乙酯∶ 水（V ∶V ∶V ∶V ）= 30 ∶29 ∶40 ∶1 为流动相; 流速0.75 ml·min-1; 检测 波长450 nm; 柱温25 ℃; 进样量20 μl。色谱图见图1。 3 结果