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第五章第五节基因克隆技术 主讲人：吴玉琴 其他组员：沈远志、谭顺坚、林敏婷、梁丽欢、何东明 在多细胞的高等生物个体水平上，克隆表示由具有相同基因型的同一物种的两个或数个个体组成的群体。从同一受精卵分裂而来的单卵双生子（monozygotic twins）便是属于同一克隆。 5. 5 基因克隆（clone）技术 在细胞水平上，克隆一词是指由同一个祖细胞（progenitor cell）分裂而来的一群带有完全相同遗传物质的子细胞。 在分子生物学上，人们把将外源DNA插入具有复制能力的载体DNA中，使之得以永久保存和复制这种过程称为克隆。 5. 5. 1 RACE技术(rapid amplification of cDNA ends) 是由Frohman等(1988)发明的一项技术。是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，无须建立cDNA文库，可以在很短的时间内获得有利用价值的信息。RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3端和5端的方法。 一般分5’ RACE和3’RACE两种：3-RACE较简单，首先将mRNA或总RNA用PolyT引物反转录，根据一般基因具有polyA尾巴的特点，选用特异引物(根据已知序列设计)和PolyT引物PCR即可。 5-RACE相对较难，目前流行几种5-RACE。其一为加接头(传统)