DNA克隆技术PPT参考幻灯片.pptVIP

* 转化后的克隆群体： * 含氨苄平板 连接 目的基因 基因载体 连接酶 转化 七、重组体克隆的筛选与鉴定 筛 宿主细胞 * （一）初筛：遗传检测法 1）抗药性标志的选择 pBR322 Amp Tet 插入片段 Amp平板 Tet平板 * 2）标志补救（?-半乳糖苷酶法） lacZ Am N2H ?片段 COOH ?片段 * X-gal Lac Z 蓝色化合物 X-gal * α 互补的检测 目 录 * （LacZ基因 N端序列） 插入片段 （LacZ基因失活） LacZ基因 C端序列 LacZ酶 * （二）酶切鉴定 凝胶电泳检测 加样孔 DNA Marker 空质粒 重组质粒 重组质粒酶切 重组质粒的PCR扩增片段 * （三） DNA序列检测 ACTGAAGGCT * 原位杂交 （四） 菌落杂交筛选法 * （五）免疫化学检测法 放射性抗体检测法 滤膜（固定抗体） + * 目的基因 基因载体 重组体 分 切 接 转 筛 表 总体技术路线 * 外源基因在宿主细胞中的表达 重组子 目的基因的mRNA 表达蛋白质 大肠杆菌（ E.coli）受体细胞 表 * 1 E.coli表达体系 优势： 一种成熟的基因克隆表达的受体细胞 繁殖迅速，培养代谢易于控制 易于进行遗传操作和高效表达 * 不足之处： 1）缺乏适当的转录后和翻译后加工机制