第四章动植物细胞培养产酶 文档资料.ppt

– 动物细胞培养的特点 ? 主要用于生产蛋白质 ? 生长缓慢 ? 容易受污染（细菌、支原体），培养过程中需添加 抗生素 ? 对剪切力特别敏感（胞外缺少保护结构） ? 大部分具有贴壁依赖性 —— 贴壁培养 ? 培养基成分复杂，价格高昂 ? 细胞生命有限，一般最多继代培养 50 代即退化死亡 – 动物细胞培养方式 —— 悬浮培养 ? 适用于非贴壁依赖型细胞 – 杂交瘤细胞、肿瘤细胞、体液（血液、 淋巴液）细胞 ? 类似于微生物细胞的深层发酵，但 工艺条件有较大差别 – 对通气、搅拌耐受性差 – 对氧气的要求较微生物低，培养时需通 入一定比例 CO 2 ? 优点（相对于贴壁培养） – 细胞在培养液中均匀分散，生长情况良 好 – 传代培养容易，无需消化分散细胞 – 培养基中营养成分利用率高 第 四章 动 植 物 细 胞 培 养 产 酶 The production of Enzyme by Culturing of Animal or Plant Cells ? 概述 – 动物细胞 ? 无细胞壁，容易贴壁 ? 对营养要求严格（血清培养基） ? 对环境敏感（ pH 、溶氧、温度、剪切应力） – 植物细胞 ? 有细胞壁，但比微生物的细胞壁脆弱 ? 营养要求较动物细胞简单 ? 生长缓慢，培养周期长，要达到高密度较困难 – 植物细胞与动物细胞、微生物细胞培养的比较 特征 哺乳动物细胞 植物细胞 微生物细胞 大小 ( ? m) 10 ～ 100 10 ～ 100 1 ～ 10 生长形式 悬浮、贴壁 悬浮 悬浮 营养要求 很复杂 很复杂 简单 倍增时间 (h) 15 ～ 100 20 ～ 120 0.5 ～ 5 细胞分化 有 有限分化 无 环境影响 非常敏感 敏感 一般 产物存在部位 胞内或胞外 胞内或胞外 胞内或胞外 产物浓度 低 低 高 供氧需求 ( K L a ) 1 ～ 25 20 ～ 30 100 ～ 1000 产物种类 疫苗、单抗、酶、 生长因子、激素等 天然色素、天然 有机化合物等 抗生素、有机 小分子、酶等 – 植物细胞与动物细胞、微生物细胞培养的比较 ? 动物细胞、植物细胞和微生物细胞可以用相同方式 培养 ? 动物细胞、植物细胞的生产周期比微生物长 ? 植物细胞和动物细胞对剪切力敏感 ? 植物、微生物和动物细胞的主要目的产物各不相同 – 动物细胞 —— 蛋白疫苗、抗体、激素、酶（蛋白质或多 肽） – 植物细胞 —— 色素、香精、天然产物（小分子）、酶 ? 本章主要内容 – 动植物细胞中酶生物合成的调节 – 植物细胞培养产酶 ? 植物细胞及其培养特点 ? 植物细胞培养及产酶的工艺控制 – 动物细胞培养产酶 ? 动物细胞及其培养特点 ? 动物细胞培养及产酶的工艺控制 – 从基因到蛋白质 – 有关微生物细胞中酶合成的调节理论也基本适 用于动植物细胞 – 动植物细胞具有比微生物更多的调节方式 ? 转录水平调节 ? 翻译水平调节 ? 激素、神经调节 DNA RNA Protein Active Enzyme 转录 逆转录 复制 翻译 ？ 折叠 第一节 动植物细胞中酶生物合成的调节 – 基因扩增加速酶的合成 ? 通过增加基因的数量调节基因表达，可以发生在个 体发育某一阶段或细胞分化某一过程 ? 细胞的一种应急方式 ? 基因扩增可以由选择压力引起 – 耐药性细胞的抗药性产生 – 例： CHO 细胞为对抗氨甲基喋呤对二氢叶酸还原酶的抑制， 编码这种酶的基因急剧扩增 第一节 动植物细胞中酶生物合成的调节 – 增强子促进酶的生物合成 ? 增强子（ modulator ） —— 能高效增强或促进基因转 录的一段 DNA 序列 ? 增强子能促进同源或异源启动基因的转录活性，可 高效增强某些酶基因的表达 ? 具有细胞或组织特异性，在不同细胞或组织中增强 效果不同 – 抗原诱导抗体酶的生物合成 ? 抗体酶（ abzyme ）：催化性抗 体，是具有生物催化功能的抗 体分子，是人工改造的对抗体 可变区赋予催化特性的特殊抗 体 ? 修饰法