实验三小鼠肝DNA提取及鉴定.pptVIP

实验三 小鼠肝组织DNA的提取 及其含量测定 原理 SDS:破坏细胞膜、核膜,使组织蛋白与 DNA分子分离; EDTA:抑制 DNase,减少DNA分子降解 酚/氯仿:除去蛋白质,氯仿可除去微量酚 无水乙醇:沉淀DNA。 A26的应用 DNA或RNA的定量 A260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40pug/ml单链DNA(或RNA) 20pug/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品:A260/A280=18 RNA纯品:A260/A280=2.0 操作步骤 )肝匀浆的制备 (二)提取DNA 1.取05m匀浆液加入15m离心管中,加 入10%SDS溶液0.1m,颠倒混匀后,室温 5 min 2.在上述溶液中加入饱和酚0.25ml,氯仿: 异戊醇(24:1)0.25ml,充分混匀,室温放 5min,12000rpm离心5min; 操作步骤 3.小心取上清液约0.4-0.5m,加入0.5ml 氯仿:异戊醇(24:1),混匀,室温放5min 12000rpm离心5min 4.取上清液02ml,加入0.3体积(即60p) 的NH4Ac,2.5体积(即0.5m)的无水乙醇 充分混匀,12000pm离心5min,小心倒去 溶液,吸干。DNA沉淀加入1.0mTE缓冲 液溶解。