霍乱弧菌实验活动风险评估报告.doc

霍乱弧菌 实验活动风险评估报告 生物学特性 种类和细菌分型 霍乱弧菌（Vibrio cholerae）是人类霍乱的病原体，它可引起一种古老且流行广泛的烈性传染病，曾在世界上引起多次大流行。霍乱主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死亡率甚高，属于国际检疫传染病。 霍乱弧菌有耐热的O抗原和不耐热的H抗原。根据O抗原的不同，现已有155个血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，其余的血清群分布于地面水中，可引起人类胃肠炎等疾病，但从未引起霍乱的流行。H抗原无特异性，棉衣扩散试验表明所有霍乱弧菌拥有相同的H抗原。 O1群霍乱弧菌根基其菌体抗原由3种抗原因子A、B、C组成，又可分为3个血清型：小川型（Ogawa）、稻叶型（Inaba）和彦岛型（Hikojima）。根据表型差异，O1群霍乱弧菌的每一个血清型还可分为2个生物型，即古典生物型（Classical biotype）和El Tor生物型（El Tor biotype）（因在埃及西奈半岛El Tor检疫站首次被分离出而命名）。古典生物型不溶解羊红细胞，不凝集鸡红细胞，对50IU的多粘菌素敏感，可被第IV群噬菌体裂解，而El Tor弧菌则完全相反。这两种型别除个别生物学性状稍有不同外，形态和免疫学性基本相同，在临床病理及流行病学特征是没有本质的差别。自1817年以来，全球共发生了七次世界性大流行，前六次的病原是古典型霍乱弧菌，第七次的病原是El Tor 生物型。 O139群在抗原性方面与O1群之前无交叉，序列分析发现0139群失去了O1群的O抗原基因，出现了一个约36kb的新基因。该基因编码与O1群不同的脂多糖抗原和荚膜多糖抗原，但该抗原与O22和O155等群可产生抗原性交叉。在遗传性方面，如核糖型、限制性酶切电泳图谱、外膜蛋白、毒性基因等则与O1群的古典型和El Tor生物型的流行株相似 来源 1883年，德国人科赫首次分离出霍乱弧菌。1892年，国家卫生会议将霍乱弧菌纳入国际卫生检疫疾病。1992年，一个新的流行株O139（Bengal）在沿孟加拉湾的印度和孟加拉的一些城市出现，并很快遍及亚洲，这是首次由非O1群霍乱弧菌引起的流行。 传染性 病人和带菌者是霍乱的主要传染源，其中的轻型和隐形感染者不易被确诊，但往往不能及时隔离和治疗，在疾病传播上起着重要作用。 传播途径 人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，霍乱是经粪—口感染的肠道传染病，主要经水、食物及生活密切的接触传播。病人及带菌者的粪便或排泄物污染水源或通过食物传染，引起霍乱或霍乱暴发流行。霍乱弧菌能通过传染鱼、虾等水产品引起传播，日常生活接触和苍蝇亦起传播作用。 易感性 人群对霍乱弧菌普遍易感，本病隐形感染较多。病后可获得一定免疫力，能产生抗菌抗体和抗病毒素抗体，但亦有再感染的报告。 潜伏期 霍乱的潜伏期较短，一般数小时至5d左右，多数1~2d。在潜伏期末，常能从病人的粪便中查出霍乱弧菌，有时在腹泻出现前数日即能查出。 剂量—效应关系 在正常胃酸的条件下，需要进入大量细菌（10^8个）方能引起霍乱感染，但当胃酸低时，感染剂量可减少到10^3~10^5个细菌。 致病性 在一定条件下，霍乱弧菌进入小肠后，依靠鞭毛的运动，穿过粘膜表面的黏液层，可能借菌毛作用黏附于肠壁上皮细胞上，在肠黏膜表面迅速繁殖，经过短暂的潜伏期后便迅速发病。该菌不侵入肠上皮细胞和肠腺，也不侵入血流，仅在局部繁殖和产生霍乱肠毒素。此毒素作用于肠黏膜上皮细胞和肠腺，使肠液过度分泌，从而导致患者出现上吐下泻的症状，泻出物呈“米泔水样”并含大量弧菌，此为本病典型的特征。 致病物质 霍乱弧菌的致病物质涉及染色体上多个基因，它们主要包括由ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基因。另外，还有两个不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap。 （1）霍乱肠毒素 霍乱肠毒素是目前已知的致泻毒素中最为强烈的毒素，是肠毒素的典型代表。它由一个A亚单位（分子量为27.2kDa）和5个形同的B亚单位（每个亚单位分子量为11.7kDa）构成的一个热不稳定性多聚体蛋白，分别由结构基因ctxA和ctxB编码。ctxAB操纵子位于染色体上称作核心区的部位，核心区的两端为重复序列（RS1）。霍乱弧菌古典生物型染色体上广泛散布着以2拷贝ctx为一组的ctx单元，El Tor生物型染色体上CTX则为多拷贝随机分布。B亚单位可与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合，介导A亚单位进入细胞，A亚单位在发挥毒性作用前需经蛋白酶作用裂解为A1和A2两条肽链。A1作为腺苷二磷酸核糖基转移酶，可使NAD（辅酶I）上的腺苷二磷酸核糖转移到G蛋白上，形成GS。GS的活化可使细胞内cAMP水平升高，主动分泌NA+、K+、HCO3-和水，