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细胞生物学实验手册 授课教师：毛晓霞（一）成绩 实验成绩构成 分数 评分细则 备注 一实验目的、 二 实验原理、三实 预习报告 3 分 不全或未完成扣 3 分 验仪器与材料、 四实验步骤、 五 注意事项 一实验原理、 二 课堂提问 2 分 答错一次扣 2 分 步骤、三注意事 项 实验结果 10 分 ☆ 10 分√ 8 分，操作 基本操作规范、 不规范扣 2 分 收拾试验台 一、内容完整，对实 验结果分析透彻 A+15 分 六实验结果与 二、内容完整 A 12 分 实验报告 15 分 分析、七作业、 三、内容构成不完整 八思考题 B 10分 四、凡抄袭他人和被 抄袭发现者 一律 C 5 2 分 1、实验占期末总成绩 30%，即 30 分；取七个实验的平均成绩 为实验最终成绩 2、分组名单：分 AB 两班，每班 5 组，每组 6 人 3、请假：辅导员签字的假条 +提前一天电话请假 （二）实验要点 实验一 光学显微镜使用及显微摄影技术 一、实验目的 1、了解光学显微镜结构原理并熟练掌握其操作方法； 2、掌握显微摄影技术操作流程 3、了解部分细胞生物学中所使用的大型仪器设备的操作流程及用途。 二、实验原理 显微镜的放大效能是由其照明系统所使用光的波长和透镜系 统的数值孔径决定， 缩短使用的光波长或增加数值孔径可以提高分辨 率。 可见光的光波振幅较窄， 因此使用较短波长的紫外光作为光源 系统，可以提高分辨率。 三、实验内容 1、双目显微镜的操作规范： 2、NIKON80i 显微摄影系统的操作流程 3 3、胶片放大洗印技术流程 4、部分大型仪器设备介绍 荧光显微镜 Fluorescence microscope 暗视野显微镜 dark field microscope 相差显微镜 微分干涉差显微镜 倒置显微镜 inverse microscope 显微操作仪 透射电子显微镜 TEM 四、作业 1、双目显微镜操作流程规范 五、思考题 1、暗视野显微镜的定义与应用 2、相差显微镜的定义与应用 实验二 血涂片的制备及细胞大小的测量 一、实验目的： 1、掌握血涂片的制备技术 2、认识血液中红细胞和各类白细胞的形态 3、掌握目镜测微尺的使用方法 二、实验原理： 将血液样品制成单层细胞的涂片标本， 经瑞氏－吉姆萨染液染色后， 不同白细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。 碱性粒细胞的颗粒呈蓝紫色， 酸性粒细胞的颗粒呈 7 橘红色，中性粒细胞的颗粒呈粉红色。 根据细胞中颗粒的颜色、 大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将白细胞进行分类计数。三、实验步骤 4 （一）血涂片的制备 1、消毒与取血 消毒 先按摩取血部位 ,使血流通畅 ;再用酒精消毒采血针和取血部位 (如指尖 ). 取血 待酒精干后 ,刺破皮肤 ,使血自然流出 ,勿挤 . 2、推片 取一块边缘光滑的载片做推片 .将其一端置于血滴前方 ,向后移动到接触血滴 , 使血液均匀分散在推片与载片的接触处 .然后使推片与载片呈 30°～40°角,向另一端平稳地推出 ,迅速在空气中摇 ,使之自然干燥 . 3、染色 加瑞氏－吉姆萨 A 染液 1－ 2 滴，染色 1 分钟，再将瑞氏－吉姆萨 B 染液滴加于 A 液上面（滴加之量为 A 液的 2－3 倍），染色 5－10 分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉 ,用吸水纸吸干 ,自然干燥后 ,即可镜检观察 4、观察 . 四、注意事项 玻片的清洗 : 使用玻片时只能手持玻片边缘 ,切勿触及玻片表面 ,以保持玻片清洁 ,干燥 ,中性 ,无油腻 . 细胞染色对氢离子浓度十分敏感 ,在染色过程中玻片必须化学清洁 ,配制瑞氏染液必须用优质甲醇 ,稀释染液必须用缓冲液 ,冲洗用水应近中性 , 否则各种细胞染色反应异常 ,致使细胞的识别困难 ,甚至造成错误 . 染色时间与染液浓度 ,室温高低 ,细胞多少有关 .染液越淡 ,室温越低 , 细胞越多 ,所需染色时间越长或应适当增加染液量 ,因此染色时间应视具体情况而定 .特别是更换新染料时必须经试染 ,摸索最佳染色条件 . 染液不可过少 ,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净 .冲洗时应用流水将染液冲去 ,不能先倒掉染液 ,以免染料沉着于血片上 . 测微尺的使用 显微测微尺是用来测量细胞在显微镜下长度的工具 ,由目镜测微尺和镜台测微尺组成 ,两尺配合使用 . 计算细胞、细胞核体积的公式： 圆 形 V=4/3πr 3(r 为半径 ) 椭圆形 V=4/3π ab2(a、 b 为长、短半径 ) 核质比 N／D=Vn／ (Vc —Vn)(Vn 为核的体积， Vc 是细胞质的体积 ) 五、作业题 1、制备一张血涂片，观察并描述其中各类血细胞的形态特征 2、任选 20 个红细胞，测量其直径，并计算出平均